Серологическая диагностика сифилитической инфекции. Какие анализы крови сдают на сифилис: rw, рпга, ифа, vdrl, rpr, рибт, расшифровка результатов тестов

Непрямые методы диагностики сифилиса.

Для диагностики сифилиса применяется множество методов исследования, различающихся по технике проведения и предназначению. Прямые методы направлены на обнаружение возбудителя в исследуемом материале с помощью микроскопии (микроскопия в темном поле и др.) или ПЦР.

Помимо методов прямой детекции бледной трепонемы (T. pallidum), при обследовании на сифилис широкое применение получили непрямые (серологические ) методы исследования, выявляющие антитела к возбудителю сифилиса в сыворотке крови и цереброспинальной жидкости. К непрямым методам диагностики сифилиса относятся серологические реакции ИФА, РПГА, КСР, РИФ и РИФ-абс, РИБТ, ПЦР, экспресс-метод, иммуноблот и другие.

Серологические методы диагностики инфекционных заболеваний.

Серологические критерии диагностики основаны на специфических реакциях "антиген-антитело". Реагируют антигены (компоненты клеточных стенок, жгутиков, капсул, ДНК и токсинов) тех микроорганизмов, которые необходимо определить, с антителами , содержащимися в сыворотках. Между антигенами и соответствующими им антителами происходит связывание, что и положено в основу методов серологической диагностики. Серологические реакции применяются для определения неизвестного антигена (источником которого является бактерия, вирус, токсин и др.) с помощью известного антитела или для определения антитела в сыворотке с помощью известного антигена.

Серологические реакции классифицируют в зависимости от состояния антигена и особенностей среды, в которой взаимодействуют антиген и антитело, а также по способу проведения.

Для проведения серологических реакций испольуют множество лабораторных методов, таких, как агглютинация, преципитация, связывание комплемента, иммунофлуоресценция, иммуноферментный и радиоиммунный анализ и другие. Эти реакции позволяют эффективно проводить предварительную идентификацию микроорганизмов.

Сыворотки, которые необходимы для постановки серологических реакций, получают экспериментальным путем, в частности, их производят институты вакцин и сывороток, и предлагают в составе коммерческих диагностических наборов.

Серологические методы являются важным инструментом в диагностике и лечении инфекционных заболеваний человека и животных, поскольку с их помощью можно не только идентифицировать возбудителя заболевания, но и обнаружить в крови больных и переболевших специфические антитела к соответствующим возбудителям. Серологические методы в настоящее время являются самыми эффективными методами диагностики при невозможности или трудностях выделения возбудителя, и сравнительно редко дают ложноположительные и ложноотрицательные результаты.

Использование серологических методов для диагностики сифилиса

В основе серологических лабораторных методов диагностики сифилиса лежит способность организма давать иммунный ответ на появление возбудителя. С помощью серологических реакций в сыворотке (плазме) крови (или цереброспинальной жидкости) выявляют следы иммунного ответа на заражение, а именно антитела к антигенам бледной трепонемы, или же сами антигены.

Для того, чтобы установить специфический характер имеющихся клинических проявлений (т.е. что они являются следствием именно сифилиса) и, в дальнейшем, контролировать динамику патологического процесса, предложено большое количество серологических методов исследований. Эти же методы также широко применяют для скрининга населения.

В соответствии с действующими национальными руководствами и клиническими методическими рекомендациями, во многих странах мира при обследованиях населения с целью выявления больных сифилисом и при установлении клинического диагноза используются передовые серологические методы. Их применяют как при наличии клинических признаков болезни у пациентов, так и в латентные периоды.

Постановка серологических реакций - один из наиболее надежных методов диагностики сифилиса. Стандартизованные серологические реакции с регламентированной методикой постановки называются серологическими тестами на сифилис. Учитывая то, что почти все серологические реакции на сифилис в определенных условиях могут быть ложноположительными или ложноотрицательными , их следует ставить в комплексе и, при необходимости, в динамике.

Серологические реакции, которые используются для определения антител в сыворотке крови больного, отличаются друг от друга чувствительностью, специфичностью, сложностью постановки и стоимостью. Помимо классических методов, для эффективной серодиагностики сифилиса используются иммунологические тесты и технологии, получившие в 21 веке новый импульс к развитию.

Антитела выявляются различными иммунохимическими (серологическими) методами, среди которых осадочные реакции, иммуноферментный, иммунохемилюминесцентный, иммунохроматографический анализы, линейный иммуноблоттинг, исследование с применением проточной флюорометрии, технология иммуночипов и другие.

Серодиагностика (исследование с помощью серологических методов) применяется для:

подтверждения клинического диагноза сифилиса,
постановки диагноза скрытого сифилиса,
контроля за эффективностью лечения, как один из критериев излеченности больных сифилисом,
профилактики сифилиса (скрининговое обследование определенных групп населения с целью выявления патологии).

Важнейшие свойства, необходимые серологическим тестам - чувствительность, специфичность, воспроизводимость

Решающим критерием при выборе метода лабораторной диагностики является его эффективность - чувствительность, специфичность и воспроизводимость.

Чувствительность - это доля положительных результатов у больных. Чувствительность метода определяется процентом положительных результатов исследования проб, заведомо содержащих специфические маркеры возбудителя (нпр., антигены возбудителя или антитела к ним).

Специфичность - доля отрицательных результатов теста у здоровых пациентов. Специфичность метода определяется процентом отрицательных результатов исследования проб, заведомо не содержащих специфические маркеры возбудителя. Таким образом, чем выше чувствительность и специфичность, тем надежнее и достовернее метод исследования.

К важным диагностическим критериям также относится воспроизводимость результатов при повторных исследованиях одних и тех же проб. Следует отметить, что, несмотря на значительные достижения в области высоких технологий, не существует методов, обеспечивающих 100% (абсолютную) чувствительность и специфичность во всех исследуемых биопробах.

В настоящее время в России официально регистрируются тест-системы, наборы, ингредиенты, обладающие при постановке реакции менее 95% чувствительностью и специфичностью. Таким образом, всегда существует возможность получения неадекватного результата.

Классификация тестов по типу применяемого антигена. Трепонемные и нетрепонемные тесты на сифилис

В современной венерологии для диагностических целей используется более десятка вариантов серологических реакций на сифилис, которые можно подразделить по разным критериям на различные категории. Классификацию проводят по методологии проведения исследований, области применения, скорости, дешевизне, требованиям к лабораторной оснащенности и т.д.

Трепонемные реакции теоретически более специфичны, однако они также дают ложноположительные результаты. Более того, они не позволяют дифференцировать нелеченный и излеченный сифилис. Результаты трепонемных реакций будут положительными в обоих случаях. Нетрепонемные реакции позволяют различать нелеченную или недавно перенесенную и излеченную инфекцию.

При обследовании рекомендуется проводить и трепонемную, и нетрепонемную реакции. Для установки и подтверждения диагноза "сифилис" требуются положительные результаты при проведении тестов обоих типов - трепонемных и нетрепонемных. Поэтому нетрепонемные тесты применяются в комбинации с трепонемными тестами, и проводятся до начала, в процессе и после окончания лечения в определенные временные интервалы.

1. Нетрепонемные тесты

Наиболее известные из нетрепонемных тестов с визуальной расшифровкой результатов - это

RW - реакция Вассермана с липидными антигенами (реакция связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном, РСКк)
реакция Канна (не используется в настоящее время),
цитохолевая реакция Закс-Витебского (не используется в настоящее время),
микрореакция преципитации с плазмой или инактивированной сывороткой (МРП или РМП),
RPR (тест быстрых плазменных реагинов, Rapid Plasma reagin),
TRUST (тест с толуидиновым красным и непрогретой сывороткой, Toluidin Red Unheated Serum Test).

Среди нетрепонемных тестов имеются 2 теста с микроскопическим считыванием результатов реакции:

1. VDRL - (Venereal Disease Research Laboratory);

2. USR - тест определения активных реагинов плазмы (Unheated Serum Reagins).

Реактивность в нетрепонемных тестах обычно указывает на повреждение тканей и не всегда специфична в отношении сифилиса. Простота выполнения и низкая стоимость позволяет использовать их как отборочные реакции при установлении предварительного диагноза сифилиса.

2. Трепонемные тесты

В трепонемных тестах используются специфические антигены трепонем. Эти тесты обязательны для подтверждения диагноза (РПГА, РИТ, РИФ и ИФА). Они являются более сложными и дорогостоящими, чем тесты 1-й группы, но и более специфичными и чувствительными. Выявление антител в спинно-мозговой жидкости также производится с помощью трепонемных тестов.

Традиционные трепонемные реакции, подтверждающие диагноз сифилиса, требуют дорогого лабораторного оборудования и опытного персонала, поэтому они редко проводятся вне специализированных лабораторий. Однако сейчас их можно заменить простыми и быстрыми трепонемными реакциями, которые возможно проводить на местах и в которых используется цельная кровь. Проведение этих реакций не требует длительного обучения, специальных условий для хранения реактивов и оборудования.

Сравнительная дешевизна, удобство и практичность трепонемных экспресс- реакций привлекают к ним внимание не только как к методам подтверждения диагноза. Эти реакции могут применяться для скрининга сифилиса в рамках оказания первичной медицинской помощи (их можно проводить на местах, в том же лечебно-профилактическом учреждении) или в районах, где лаборатории не доступны. Однако поскольку антитела к T. pallidum определяются на протяжении ряда лет независимо от того, лечился больной или нет, трепонемные экспресс-реакции нельзя использовать для оценки эффективности лечения и дифференциальной диагностики нелеченного и излеченного сифилиса.

Классификация серологических методов диагностики сифилиса по типу определяемых антител

В современной дерматовенерологии для диагностики используются различные серологические реакции на сифилис. Часть методов, которые были актуальны ещё десять лет назад, перестают применяться из-за сложности или недостаточной специфичности. В зависимости от выявляемых антител, методы серологической диагностики сифилиса подразделяются на три группы:

I. Липидные (реагиновые) реакции - определяются антитела к липидным антигенам (реагинам):

1) флокуляционные: микрореакция на стекле с липидными антигенами -экспресс-метод диагностики (микрореакции преципитации - МРП), VDRL, CMF (cardiolipin microflocculation test), RPR и др.;

2) реакция связывания комплемента (РСК) с липидными антигенами: реакция Вассермана (РВ), качественная и количественная методика постановки, термостатная и на холоде (реакция Колмера);

3) осадочные реакции, которые в настоящее время не используются: реакция преципитации Кана, цитохолевая реакция Закса - Витебского и др.;

II. Групповые трепонемные реакции - определяются антитела к групповым трепонемным антигенам (входящим в состав микробной клетки как патогенных, так и сапрофитных трепонем):

1) РСК с протеиновым антигеном Рейтера;

2) реакция иммунофлюоресценции (РИФ);

3) реакция иммунного прилипания (РИП).

III. Видоспецифичные протеиновые трепонемные реакции - определяются антитела к специфическим видовым антигенам Treponema pallidum:

1) реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ);

2) реакция иммунофлюоресценции РИФ-абс и ее варианты (IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS, и др.);

3) реакция непрямой гемагглютинации бледных трепонем (РПГА) и её модификация TPPA.

4) иммуноферментный анализ (ИФА);

5) иммуноблотинг.

Практическое использование серологических реакций на сифилис

Различные серологические реакции используются для разных практических целей.

За рубежом при массовых обследованиях населения и при необходимости экстренного выявления сифилиса используются нетрепонемные отборочные реакции (VDRL, RPR и др.). Для постановки диагноза требуется подтверждение в трепонемных тестах РИФ-Абс (FTA-ABS), РПГА или TPPA. В настоящее время, рекомендуется использовать ИФА, как замену VDRL в скрининговых тестах. Это связано с тем, что тест ИФА отличается чувствительностью, специфичностью, возможностью автоматизировать исследования, а также с разработкой диагностических тест-наборов. Кроме того, обосновывается реверсивная схема порядка исследования на сифилис, когда первыми используются трепонемные тесты.

С целью контроля за эффективностью терапии и для оценки активности инфекции рекомендуют VDRL в количественном исполнении. В качестве подтвердающего/дополнительного теста используется тест ИФА на противотрепонемные антитела IgM.

В отечественной практике используют комплекс серологических реакций (КСР), включающий реакцию микропреципитации (РМП) с кардиолипиновым антигеном и РСК с кардиолипиновым и трепонемным антигенами. В последнее время рекомендуется в КСР заменять РСК на ИФА или РПГА. Также используются РИФ (и ее модификации - РИФ-Абс и остальные), РИБТ.

РИБТ применяют в качестве реакции экспертизы в случаях расхождения трепонемных реакций.

Подходы к лабораторной серологической диагностике сифилиса в Российской Федерации

Внедрение в практику унифицированных методов клинических лабораторных исследований в СССР и Российской Федерации позволило ввести более прогрессивные диагностические методы, упорядочить работу клинико-диагностических лабораторий, повысить производительность труда, сократить дублирование лабораторных исследований и стало основой для разработки рациональных форм готовых наборов реактивов.

В 1985 году в СССР, в целях совершенствования диагностики сифилиса, нетрепонемная реакция РСК с неспецифическим (вассермановским) антигеном и осадочные реакции (цитохолевая и Кана) были исключены из диагностического комплекса, как менее чувствительные и не дающие дополнительной информации.

Вместо них, в составе комплекса серологических реакций на сифилис (КСР), было предусмотрено применение реакции связывания комплемента с трепонемным и кардиолипиновым антигенами (РСКт) и микрореакции преципитации с кардиолипиновым антигеном (РМП). Более высокая чувствительность и информативность этого комплекса реакций обеспечивала выявление не только реагинов, но и противотрепонемных антител.

1985 год

1. РМП с кардиолипиновым антигеном с плазмой крови и инактивированной сывороткой крови. Отборочный тест в случае изолированного применения.

2. РСК с трепонемным и кардиолипидовым антигенами; качественная и количественная методики постановки, термостатная и на холоде;

3. Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ); пробирочная и меланжерная методики постановки;

4. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) в следующих модификациях: РИФ с абсорбцией (РИФ-абс) с сывороткой крови и капиллярной кровью, РИФ-200, РИФ с цельной спинномозговой жидкостью (РИФ-ц); качественные и количественные методики постановки. Диагностика скрытых и поздних форм сифилиса, распознавание ЛПР (ложно-положительных результатов)

5. Комплекс классических серологических реакций (КСР): РСК (реакции Вассермана) с кардиолипиновым и трепонемным антигенами + РМП. Профилактическое обследование населения на сифилис, диагностика всех форм сифилиса, контроль эффективности лечения, обследование лиц, контактных по сифилису.

В 2001 году Минздравом РФ был утвержден новый нормативный документ, регламентирующий порядок проведения диагностических тестов - приказ Министерства Здравоохранения РФ №87 от 26 марта 2001 года «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса» .

С целью совершенствования лабораторной диагностики сифилиса, повышения качества работы и предупреждения дальнейшего распространения заболеваемости сифилисом рекомендовано заменить РСК в комплексе серореакций (КСР) при диагностике сифилиса на ИФА и РПГА в качестве отборочных и подтверждающих тестов, т.к. эти тест-системы являются высокочувствительными, специфическими и воспроизводимыми.

Приказ №87 от 26 марта 2001 года «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса» предусматривает применение для серо- и ликвородиагностики сифилиса в России следующих методов:

1. РМП и зарубежные аналоги (VDRL, RPR и аналогичные микрореакции) в качестве отборочных тестов при обследовании населения на сифилис. Постановка РМП осуществляется с плазмой или инактивированной сывороткой крови.
2. Иммуноферментный анализ (ИФА). Антиген из культуральных или патогенных бледных трепонем. Диагностические реакции, в том числе для ликвородиагностики. В связи с простотой постановки и наличием коммерческих тест-систем могут использоваться как отборочные тесты.
3. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). Антиген из культуральных или патогенных бледных трепонем. Отборочные и диагностические реакции.
4. Качественный и количественный варианты РИФ (РИФ-абс, РИФ-ц, РИФ с капиллярной кровью из пальца). Антиген - патогенная бледная трепонема штамма Никольса.
5. Комплекс серологических реакций (КСР) на сифилис, состоящий из реакции связывания комплемента (РСК) с трепонемным и кардиолипиновым антигенами, и РМП. Возможно заменить реакцию связывания комплемента на ИФА или РПГА также в сочетании с РМП. КСР относится к диагностическим тестам.
6. Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ), в которой в качестве антигена используют патогенные бледные трепонемы штамма Никольса. РИБТ относятся к диагностическим подтверждающим тестам.

Таким образом, последовательность обследования пациентов на сифилис в учреждениях здравоохранения рекомендуется планировать следующим образом:

1. При первичном обследовании производится постановка отборочной (скрининговой) реакции микропреципитации (РМП) или ее модификации (RPR, TRUST, VDRL) в количественном и качественном вариантах и в случае положительного результата - любого специфического подтверждающего трепонемного теста (РПГА, ИФА, КСР, РИФ, РИТ);

2. После окончания терапии ставится РМП или ее модификация и по снижению титра судят о динамике инфекционного процесса и эффективности терапии. Подтверждением эффективности проведенной терапии считается снижение титра в 4 и более раз в течение 1 года.

Прием по предварительной записи! Суббота, воскресенье.

Ставиться на совокупности данных анамнеза,конфронтации,клинической картины и лабораторных данных,включающих обнаружение возбудителя и результатов серологического обследования.Подтверждение диагноза лабораторными данными обязательно.

Методы диагностики,подтверждающие наличие сифилиcа

Наименование	Метод проведение	Подтверждающие признаки
	Распрос больного	Подтвержденный диагноз сифилиса у полового партнера Случайная половая связь без барьерного предохранения в период,соответствующий инкубационному периоду Наличие в прошлом высыпаний в области половых органов,увеличения лимфоузлов
Клинический осмотр	Осмотр половых органов,кожных покровов,слизистой рта,ануса Пальпация высыпных элементов при их наличии Пальпация периферических лимоузлов	Наличие характерных для различных периодов сифилиса поражений кожи и слизистых. Увеличение лимфоузлов
Обнаружение T.pallidum в материале из очагов поражения,лимфатических узлов,амниотической жидкости,ликвора		Обнаружение типичных форм трепонемы
		Обнаружение специфической ДНК T.pallidum

Реакция связывания комплимента (Реакция Вассермана)

Методы диагностики, подтверждающие наличие различных форм и осложнений сифилиса

Наименование	Формы и осложнения
Исследование ликвора	Нейросифилис
Ренгенография аорты длинных трубчатых костей грудины костей черепа суставов	Ранний врожденный сифилис Поздний врожденный сифилис Третичный сифилис
Сурдологическое обследование	Неврит слухового нерва Сифилитический лабиринтит
Офтальмологическое обследование	Неврит зрительного нерва Паренхиматозный кератит

Также применяются и рутинные методы исследования - общие анализы крови и мочи,биохимический анализ крови и.т.д.

Что такое серологическая диагностика сифилиса

В большинстве случаев обнаружить возбудителя сифилиса невозможно или обнаружение
его затруднительно.Поэтому для диагностики сифилиса применяют так называемое серологическую диагностику,основанную на определении различных видов и классов антител,которые организм выработал с целью своей защиты от сифилитической инфекции т.е определяется не возбудитель инфекции,а как организм прореагировал на его появление.
Серологическое исследование (от от лат. serum - сыворотка) представляет собой лабораторный анализ плазмы каппилярной или венозной крови основаный на иммунологической реакции антиген-антитело.
В качестве антигенов используют фабрично изготовленные препараты,аналогичные по своей структуре антигенам липидов,появляющихся в организме при разрушении тканей бледной спирохетой,липидам ее мембран и специфическим молекулярным соединениям,входящих в состав мебраны бледной спирохеты (для этих целей используются очищенные и ультраозвученные штаммы трепонем или выделенные от них рекомбинантные антигены).
В лабораторных условиях к антигенам добавляется сыворотка крови обследуемого.Если в сыворотке (плазме) крови присутствуют антитела происходит реакция антиген-антитело и ее результаты обнаруживаются различными методами (положительный результат) при отсутствии антител реакция не происходит (отрицательный результат).Серологическую диагностику сифилиса осуществляют в следующих случаях.

Скрининг на сифилис

Массовое обследование определенных групп населения.Для скрининга применяются дешевые,простые и быстрые по исполнению тест системы,основанные на нетрепонемных тестах.Скринингу на сифилис подвергаются:

Беременные женщины
Доноры крови и органов для трансплантации
Некоторые профессиональные контингенты (работники питания,образования,здравоохранения)
Военнослужащие
Лица,отбывающие наказание в местах лишения свободы
Больные,готовящиеся к оперативному хирургическому вмешательству
Лица,поступившие на стационарное лечение (обязательная вассерманизация - в России,странах СНГ и некоторых других странах)

Диагностика сифилиса

Для диагностики сифилиса применяются комбинация нетрепонемных и трепонемных тестов на сифилис или только трепонемные (подтверждающие) реакции.Серологическое обследование на сифилис назначается в следущих случаях:

Лицам,имеющих клинические признаки сифилиса
Лицам с любыми генитальными язвами
Лицам - половым партнерам больных сифилисом,а также в случае близкого бытового контакта с больным вторичным сифилисом
Детям,родившимся от больных сифилисом матерей
Лицам с подтвержденным диагнозом других половых инфекций
Для подтверждения результатов скрининга (отборочных реакций)

Контроль за лечением сифилиса

Применяются нетрепонемные тесты,так трепонемные тесты остаются положительными продолжительное время после лечения,а иногда всю жизнь.

Что такое нетрепонемные тесты

Нетрепонемные тесты определяют антитела класса IgG и IgM к липидам(фосфолипидам),
липопротеинам, высвобождаемых из поврежденных клеток хозяина, вследствии сифилитической инфекции и липидам,входящим в состав мембраны бледной трепонемы. Антилипидные антитела могут появляться не только вследствие сифилиса или других трепонематозов , но и в ответ на на некоторые острые и хронические заболевания, при которых наблюдается разрушение тканей.Антилипидные антитела (реагины) образуются через 7-14 дней после образования шанкра или через 4-5 недель после инфицирования.В основном нетрепонемные тесты применяются в двух случаях:

Нетрепонемные тесты, в связи с дешевизной,доступностью простотой и быстрым сроком исполнения, применяются для скрининга сифилиса как отборочные реакции.
По изменению количественных нетрепонемных тестов судят о степени эффективности лечения сифилиса и устанавливают его излеченность.Поэтому нетрепонемные тесты применяются в комбинации с трепонемными тестами для установки диагноза сифилиса и проводятся до начала лечения,в процессе лечения и после окончания лечения в определенные временные интервалы.

В качестве антигена для проведения нетрепонемных тестов используется стандартный кардиолипин-лецитин -холестероловый антиген (который является одним из компонентов тканей человеческого организма и содержит липиды, характерные для бледной трепонемы) для проведения микрореакции преципитации,в случае определения реагинов реакцией связывания комплимента(реакции Вассермана),помимо кардиолипинового антигена применяют еще и ультразвуковой дезинтеграт культуральных трепонем (трепонемный антиген).К нетрепонемный тестам относят:

RPR (Rapid Plasma Reagins) тест быстрых реагинов (российский аналог микрореакция преципитации МР)
VDRL (Venereal Disease Research laboratory)
Реакция связывания комплимента (реакция Вассермана)

Недостатки нетрепонемных тестов

Ложноотрицательные результаты - при исследовании неразведенных образцов сыворотки, содержащих большое количество антител,за счет так называемого феномена прозоны. Это явление может наблюдаться на ранних стадиях сифилиса и у пациентов с сопутствующей ВИЧ-инфекцией.
Недостаточная чувствительность для диагностики поздней стадии сифилиса
Ложноположительные результаты (биологические ложноположительные реакции) при наличии других острых или хронических заболеваний.

Что такое трепонемные тесты

Как и при нетрепонемных тестах при проведении трепонемных тестов используется иммунологическая реакция антиген-антитела.Но в качестве антигенов применяются трепонемные антигены - либо интактные трепонемы либо очищенные и ультраозвученные трепонемы либо рекомбинантные антигены.Для проведения и обнаружения результатов реакции антиген-антитела используют более сложные и дорогие различные методы.Наиболее часто используются следующие трепонемные тесты.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ -FTA) в различный модификациях
Реакция пассивной агглютинации (РПГА - TPHA)
Иммуноферментный анализ (ИФА -EIA) в том числе рекомбинатный ИФА
Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)
Иммуноблотинг

Что такое иммуноблотинг

Иммуноблотинг (Western blot) для определения специфических IgM либо IgG является одним из современных и точных методов диагностики сифилиса.При проведении иммуноблотинга T.pallidum подвергаются электрофорезу, в результате чего происходит разделение белковых иммунодетерминант. Затем проводится обработка разделенных точек - blots исследуемой сывороткой и антителами к IgG либо IgM, помеченных ферментами или радиоактивными веществами. Выявленные с помощью иммуноблотинга определенные иммунодетерминанты являются диагностическими признаками сифилиса.
IgG-иммуноблотинг (IgG Western blot)по чувствительности и специфичности соответствует РИФ-абс.IgM -иммуноблотинг (IgM Western blot) применяется как диагностический тест при врожденном сифилисе.

Какая динамика серологических реакций при сифилисе

Антилипидные (неспецифические) антитела образуются через 7-14 дней после образования шанкра или через 4-5 недель после инфицирования.Специфические противотрепонемных антител класса IgM,обнаруживатся в конце второй недели заболевания. IgG к трепонемным антигенам появляются приблизительно через 4 недели после начала заболевания.К моменту появления клинических симптомов сифилиса в сыворотке крови пациентов можно выявить как специфические IgM, так и специфические IgG (суммарные антитела).Параметры иммунного ответа могут изменяться в результате проводимого лечения.Адекватное лечение раннего сифилиса приводит к быстрому снижению титров неспецифических антител и специфических IgM, при этом специфические IgG обычно сохраняются в сыворотке крови в течение длительного периода времени,а иногда и всю жизнь.

Сроки появления положительных серологических реакций при сифилисе

Частота положительных результатов серореакций при разных стадиях сифилиса

Test	Первичный	Вторичный	Скрытый	Третичный

Как интерпретировать тесты на сифилис

В мировой медицинской практике для диагностики сифилиса используют три реакции: нетрепонемный тест - RPR или VDRL и два трепонемных тестов - реакцию иммунофлюоресценции (РИФ-FTA) и реакцию пассивной гемоагглютинации (РПГА - TPHA)

			Интерпретация
			нет сифилиса или инкубационный период или очень ранняя стадия
			нелеченый или недавно леченый сифилис
			первичный сифилис или ложноположительные РПР и РИФ
			ложноположительные РПР и РПГА или ложноотрицательная РИФ
			леченый сифилис или нелеченый поздний сифилис
			биологическая ложноположительная реакция
			ранний первичный сифилис или недавно леченый сифилис или ложноположительная РИФ
			пролеченый сифилис или ложноположительная РПГА

В России для диагностики сифилиса еще применяют реакцию связывания комплимента (реакцию Вассермана) и реакцию иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)

Первичный сифилис

При первичном серонегативном периоде сифилиса бывают положительные РИФ и Ig ИФА как наиболее чувствительные серореакции. Однако это не является основанием для постановки таким больным диагноза первичного серопозитивного сифилиса.У ряда больных в этом периоде бывает изолированный положительный результат при постановке реакции Вассермана с трепонемными или с кардиолипиновым антигенами. В конце 3-й или в течение 4-й недели после появления шанкра становятся положительными стандартные серологические реакции - с этого момента начинается первичный серопозитивный период сифилиса. На 1-2-й неделе первичного серопозитивного сифилиса отмечается увеличение степени позитивности серореакции (1+, 2+, 3+) и нарастание титра реагинов (1:5, 1:10, 1:20). РИФ и ИФА уже у всех больных дают резко положительный результат, но РИБТ, как правило, отрицательная или процент иммобилизации очень низок. Диагноз первичного серопозитивного сифилиса ставится и тем больным, у которых осадочные реакции и реакция Вассермана с неспецифическими антигенами дали даже однократный слабоположительный результат. При дальнейшем течении первичного сифилиса все серологические реакции становятся резко положительными (4+); титр реагинов достигает 1:80, 1:160, РИФ продолжает быть резко положительной, но РИБТ у большинства больных еще остается отрицательной или может стать слабоположительной.

Вторичный сифилис

При вторичном свежем сифилисе резко положительный результат по всем стандартным серологическим реакциям наблюдается почти в 100% наблюдений; титр реагинов наиболее высок - 1:160; 1:240 или 1:320. РИФ - 4+; РИБТ дает положительнй результат более чем у половины больных, однако процент иммобилизации трепонем невысок (40-60%).
При вторичном рецидивном сифилисе положительный результат по стандартным серологическим реакциям отмечается в 96-98% наблюдений. Отрицательные результаты могут иногда объясняться малосимптомным рецидивным течением, наличием астенизации и сочетанием сифилиса и ВИЧ-инфекции. РИБТ дает положительный результат у 85-90% больных при выраженной степени иммобилизации - 80-90-100%.

Третичный сифилис

Третичный сифилис характеризуется положительными результатами по стандартным серологическим реакциям в 50-90% наблюдений и положительной РИБТ у 92-100% пациентов с высоким процентом иммобилизации.

Скрытый сифилис

Диагноз скрытого серопозитивного сифилиса, как указывалось выше, устанавливают только по положительным серореакциям в крови с обязательным подтверждением их по РИБТ, так как только РИБТ (и в меньшей степени РИФ) позволяет отдифференцировать ложноположительные серореакции (даже с позитивностью в 2+ или 3+) от истинно положительных.

Нейросифилис и висцеральный сифилис

Разные формы сифилиса нервной системы и висцерального сифилиса имеют различную частоту и выразительность стандартных серореакции. Так, прогрессивный паралич в 100% случаев сопровождается резко положительными всеми стандартными серологическими реакциями. Сифилис сосудов мозга, спинная сухотка, сифилитическое поражение сердечно-сосудистой системы сопровождаются положительными серореакциями лишь в 40-50-60% наблюдений. Однако РИБТ почти при всех перечисленных патологических состояниях дает резко положительный результат (90-100% иммобилизации).

Врожденный сифилис

При диагностировании врожденного сифилиса в первые 2 мес после рождения стандартные серологические реакции у ребенка не определяют, т. к. они могут быть положительными за счет пассивной передачи реагинов через плаценту. По этой же причине не имеет значение и положительный результат РИБТ. Пассивно переданные от матери ребенку имобилизины самопроизвольно исчезают в течение 6 мес после рождения. Если ребенок инфицируется незадолго до родов, то в этом случае РИБТ будет еще отрицательной (в связи с более поздним образованием иммобилизинов), несмотря на наличие в организме ребенка сифилитической инфекции.
При врожденном сифилисе детей грудного возраста с активными проявлениями стандартные серореакции могут быть отрицательными в 1% наблюдений.При врожденном сифилисе раннего детского возраста отрицательные стандартные серореакции варьируют от 15 до 20%, но в этих случаях РИБТ дает положительные данные у 90-98% детей.При позднем врожденном сифилисе даже при наличии активных проявлений стандартные серореакции констатируются лишь у 70-80% обследованных, но зато РИБТ четко положительная у 100% больных с высоким титром иммобилизинов.

Положительные серореакции при отсутствии симптомов сифилиса

Это самый сложный вопрос в сифилидологии - положительные серореакции на сифилис при отсутствии клинических симптомов.
Различают пять ситуаций

Скрытый сифилис

нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) - положительные (хотя при позднем скрытом сифилисе - давность заболевания более 2 лет -могут быть отрицательные)
нет документированного свидетельства о полученном адекватном лечении сифилиса

Рекомендации - проведении лечения скрытого сифилиса по существующим инструкциям

Серопозитивность после лечения сифилиса

нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) - положительные,отмечается снижение титров в течении года в 4 и более раза

Рекомендации:Если контрольные тесты не проводились - назначается количественный нетрепонемный тест (МР) в течении года с интервалом в 3 месяца

Серорезистентность после лечения сифилиса

трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) положительные или отрицательные - значения не имеет
нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) - положительные,отмечается их стабильность или снижение титров в течении года менее чем в 4 раза
есть документированное свидетельство о полученном адекватном лечении сифилиса

Рекомендации:Дополнительное лечение сифилиса

Излеченный сифилис

трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) положительные
нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) - отрицательные
есть документированное свидетельство о полученном адекватном лечении сифилиса

Рекомендации:Снятие с учета

Если нет документированного свидетельства о полученном адекватном лечении сифилиса в прошлом см.ситуация №1 или дополнительно:
-исключить ранний сифилис (серонегатив)- контрольный трепонемный и нетрепонемный тест через 2 недели
-исключить поздний скрытый сифилис - исследование ликвора,клинико-рентгенологическое исследование
-исключить ложноположительный трепонемный тест (провести 2-3 трепонемных теста,включая РИБТ) в динамике
-исключить невенерический трепанематоз
-провести лечение позднего скрытого сифилиса по существующим методикам.

Ложноположительные реакции на сифилис

трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) отрицательные
нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) - положительные
наличие документированных свидетельств о полученном адекватном лечении сифилиса не имеет значения

The value of darkfield microscopy in the differential diagnosis of secondary syphilis (Calif West Med. 1926) Full text
Результаты сравнительного изучения диагностической эффективности ряда современных нетрепонемных и трепонемных тестов
Laboratory diagnosis and interpretation of tests for syphilis (Clin Microbiol Rev. 1995)

Диагностика сифилиса включает в себя:

Изучение анамнеза жизни и заболевания.
Клинический осмотр пациента.
Исследование материала с пораженных участков (лимфатические узлы, ликвор, амниотическая жидкость) на предмет обнаружения бледной трепонемы.
Проведение серодиагностики (нетрепонемные и трепонемные тесты).
Проведение дополнительных лабораторных исследований (общий анализ крови и мочи, биохимия крови и др.).

Нетрепонемные тесты позволяют обнаружить в сыворотке крови антитела к фосфолипидам, которые разрушаются вследствие данного заболевания.

К нетрепонемным тестам относятся:

Антикардиолипиновый тест (тест быстрых плазменных реагинов, RPR, экспресс-тест на сифилис).
Реакция связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном (реакция Вассермана).
Микроскопический тест.

Реакцию Вассермана можно проводить также с трепонемным антигеном. Поэтому в зависимости от того, какой материал используется в реакции, данное исследование можно отнести, как к трепонемным, так и к нетрепонемным.

Описание и принцип действия антикардиолипинового теста (RPR).

Возбудителем сифилиса является Treponema palidum. Данный возбудитель имеет несколько чужеродных для организма человека антигенов, которые по строению аналогичны кардиолипину. Иммунная система пациента реагирует на кардиолипиновые антигены выработкой специфических антител класса IgG и IgM.

Данный экспресс-тест на сифилис относится к числу нетрепонемных. Исследование позволяет выявить антифосфолипидные антитела в крови больных первичным сифилисом в 75% случаях. На стадии вторичного сифилиса результат анализа положительный в 100% обследованных. Наиболее эффективным принято считать проведение теста спустя неделю после образования сифилитической язвы или через 3- 5 недель после заражения.

Проведение данного метода диагностики актуально для скрининга при беременности и для обследования полового партнера. Также, тест используют для оценки эффективности назначенного лечения. После адекватно проведенной терапии результат антикардиолипинового теста становится отрицательным.

В связи с тем, что тест относится к ряду неспецифических возможно развитие ложноположительного результата. Это обусловлено тем, что данные антитела могут быть выявлены при ряде других инфекций, вызванных бледной трепонемой.

При условии, если результат данного метода диагностики показал положительные результаты, то рекомендуется проконсультироваться с врачом (дерматовенерологом) и провести повторное исследование, используя специфический трепонемный тест.

Исследование следует проводить натощак. Пациента ставят в известность, что на протяжении 8 часов до проведения анализа противопоказано употреблять продукты питания. С утра можно выпить стакан воды.

Обратите внимание

На сегодняшний день сдать анализы на сифилис можно в медицинских учреждениях как государственного, так и частного типа. Исследования на сифилис в лабораториях любого типа должны проводиться анонимно.

Для экспресс теста на сифилис используют антиген, в состав которого входит кардиолипин, лецитин и холестерин, а также кровь пациента. Для лучшей визуализации результата исследования используют частицы угля. При положительном результате в сыворотке образуются черного цвета флокулянты.

При титре от 1:2 до 1:320 и выше результат экспресс-теста для подтверждения диагноз сифилис принято считать положительным.

Отрицательным считают результат при полном отсутствии антител. Сомнительная реакция - низкие титры антител.

Также, в аптеке можно купить набор теста на сифилис для использования в домашних условиях.

Анализ крови РПГА: подготовка к сдаче и анализ полученных результатов

Более достоверными тестами для диагностики заболевания принято считать исследования, при помощи которых можно обнаружить специфические антигены возбудителя заболевания или комплексы антиген-антитело.

К числу таких трепонемных тестов относятся:

Реакция иммунофлюресценции (РИФ).
Реакция пассивной агглютинации (РПГА).
Иммуноферментный анализ (ИФА).
Реакция иммобилизации Treponema palidum.
Иммуноблодинг.

Что такое анализ крови РПГА?

При помощи данного исследования удается выявить агглютинацию тех эритроцитов, на поверхности которых были зафиксированы антигены возбудителя сифилиса. Анализ следует проводить в комплексе с тестом быстрых плазменных реагинов.

Это обусловлено тем, что при одиночном проведении анализа крови на сифилис методом РПГА возможно развитие отрицательного результата исследования в первые 4 недели после заражения, при первичном сифилисе и при скрытом течении заболевания.

Подготовка пациента к сдаче анализа:

Исследование показано проводить натощак.
Следует ограничить прием жидкости (вечером и утром можно выпить по стакану простой воды).
Анализ рекомендовано сдавать впервой половине дня.
На протяжении 30 минут строго противопоказано курить.
Недопустимо содержание в крови алкоголя.

В случае не соблюдения всех вышеуказанных рекомендаций возрастает риск развития ложноположительных результатов.

На сегодняшний день, данный метод исследования постепенно вытесняют более современные и высокочувствительные (экспресс методы, РПГА и т. д.). Но, тем не менее, в странах СНГ его еще используют в качестве скринингового исследования.

Расшифровка данных анализа крови на RW:

«-» - результат отрицательный.
«+/-» - сомнительный.
«++» - слабоположительный.
«+++» - положительный.
«++++» - резко положительный.

В случае резко положительного результата исследования титр составляет от 1:2 до 1:800.

В России улучшается год от года. Однако ежегодно на тестированиях выявляют тысячи заболевших людей. Обследования на эту болезнь проводят и перед беременностью, и перед любой плановой госпитализацией. Кроме того, ежегодно представители многих профессий проходят диспансеризацию, при которой, кроме всего прочего, нужно сдать анализы на сифилис. И, разумеется, без этого анализа для человека будет закрыта карьера государственного служащего, врача, да и просто вакансии вроде учителей, поваров, воспитателей.

Современная медицина знает множество способов обнаружить бледную трепонему, которая является возбудителем болезни, в крови человека. Эти методы разделяют на несколько больших групп:

В первой группе исследований - тесты, при которых в биоматериале ищут присутствие трепонемы. Для этого на исследования забирают материал из язв или пораженных болезнью органов.
Вторая, серологическая группа методов позволяет выявить косвенные следы присутствия трепонемы в организме. Здесь подразумеваются антитела, активной выработкой которых организм реагирует на инфекцию.

Мнение эксперта

Артем Сергеевич Раков, врач-венеролог, стаж более 10 лет

Прямые тесты отлично работают при первых симптомах заболевания, серологические стоит проводить примерно через неделю после появления первой язвы. Иными словами, при подозрении на заражение лучше всего прибегнуть к тестам прямого типа.

Лабораторная диагностика сифилиса

Лабораторное исследование заключается в том, что в пробирке размножают участки ДНК трепонемы в условиях повторяющихся температурных циклов. На каждом этапе количество искусственно воспроизведенных копий возбудителя болезни удваивается. Специалисты называют это амплификацией фрагментов ДНК. Происходит разделение молекул по их весу, что и позволяет выявить трепонему.

ПЦР

Методика ПЦР-исследования позволит отыскать одну молекулу сифилиса даже в том случае, если она одна на тысячи других молекул. Генетический материал для ПЦР-тестирования могут забирать из непосредственно сифилитических язв, ликвора, плацентарной ткани, крови из пальца и даже семенной жидкости. Наиболее часто врачи используют именно тканевую жидкость из язв.

Эффективность ПЦР-исследования достигает 98,6%. При правильно подготовленном исследовании ложноположительные результаты при этом методе практически исключены. Также именно к данной методике врачи прибегают, если предполагают небольшое содержание трепонем в исследуемом материале. Именно этот фактор становится определяющим, если необходимо провести анализ при подозрении на врожденный сифилис.

Темнопольная микроскопия

Темнопольное микроскопическое исследование считается одним из самых дешевых, но вместе с тем эффективных методов выявления наличия бледной трепонемы, а также:

Для исследования используют специальный солевой раствор, в который помещают препарат. После этого на предметное стекло направляют узкий пучок яркого света. Из-за так называемого феномена Тиндаля возбудители болезни начинают светиться в темном поле раствора.
Лучшим материалом для подобного типа исследования также являются пробы тканевой жидкости, полученной из генитальных язв, расположенных, соответственно, на гениталиях. Это один из самых быстрых тестов, потому что результаты анализов будут готовы через несколько часов.

Однако стоит учитывать, что темнопольный метод годится для обнаружения еще живых трепонем. Соответственно, проходить такое исследование после начала наружного лечения практически не имеет смысла, так как будет почти невозможно обнаружить живые образцы возбудителя.

RIT-тест

RIT-тест предполагает пересаживание материала от зараженного человека лабораторным кроликам. Чувствительность этих животных к инфекции сифилиса достигает 100%, так что если в биоматериале пациента содержались бледные трепонемы, то они поразят и кролика.

Однако на сегодняшний день этот метод практически не используют в силу дороговизны и временных затрат. При наличии более быстрых анализов врачи предпочитают не ждать, когда симптомы болезни проявятся у животного. Тем не менее этот метод продолжают использовать в исследовательских работах, а также для того, чтобы подтвердить или опровергнуть точность других типов анализов.

Серодиагностика сифилиса

Серологические методы позволяют вычленить не сам возбудитель сифилиса в организме, а антитела, с помощью которых организм старается победить заболевание. Ученые подразделяют серологические методы на две группы, речь о которых пойдет ниже.

К нетрепонемным тестам относятся:

РМП - реакция микропреципитации с плазмой и инактивированной сывороткой;
RPR - тест быстрых плазменных реагинов.

Чаще всего специалисты прибегают к нетрепонемным тестам в том случае, если необходимо сделать массовый скрининг на сифилис. Это связано с тем, что такие тесты достаточно дешевы, не требуют специального лабораторного оборудования и отличаются сравнительно высокой точностью.

Также они не менее эффективны при оценке проводимого лечения. С их помощью можно оперативно следить за уровнем антител к сифилису в крови.

К трепонемным тестам относятся:

ИФА - иммуноферментный анализ;
РПГА - реакция пассивной гемагглютинации;
РИФ - реакция иммунофлюоресценции;
иммуноблоттинг;
ИХЛ - иммунохемилюминесценция;
РИБТ (РИТ) - реакция иммобилизации бледных трепонем.

Трепонемные тесты назначают в тех случаях, когда нужно убедиться, что результат нетрепонемного теста не был ложноположительным. К ним же прибегают в тех случаях, если результат скрининга при помощи трепонемного теста разошелся с результатом нетрепонемного.

Кроме того, трепонемные тесты отлично подходят для применения в том случае, если у болезни еще нет видимых проявлений, но присутствуют подозрения врача, основанные на анамнезе и результатах осмотра. К сожалению, нетрепонемные тесты в этот период малоэффективны и зачастую дают ложноотрицательные результаты.

Экспресс-диагностика сифилиса

Этот тип диагностики наиболее часто используется для определенных групп пациентов:

Подобным тестом стоит воспользоваться каждой беременной женщине, чтобы обезопасить и себя, и будущего ребенка.
Кроме того, воспользоваться таким методом могут люди, которые проживают в одном помещении с сифилитическими больными, не применяют контрацепцию и часто меняют половых партнеров. Также он подойдет тем, кто не может пройти полноценное обследование в больнице или клинике.

Принцип использования экспресс-теста на сифилис можно сравнить с использованием теста на беременность, однако в нем надо брать несколько капель крови.

Тест лучше всего проводить в первой половине дня натощак. За два дня до предполагаемого тестирования врачи рекомендуют не употреблять спиртное, а примерно за час до процедуры отказаться от сигарет.

Сам анализ занимает немного времени:

Палец необходимо продезинфицировать спиртовой салфеткой, после чего из пореза выдавить несколько капель крови на тест-устройство.
Затем добавить туда же идущий в комплекте реагент.
В среднем нужно подождать 15 минут до появления результата. Специалисты предупреждают, что если результат появился по истечении получаса, то он может быть ложным.

Как вы считаете, какой метод диагностики самый точный?

Серодиагностика Экспресс-диагностика

Стоит учитывать, что если человек заразился совсем недавно, то точность и достоверность подобного тестирования не превышает 80%. Так что приравнивать его к полноценному обследованию у специалиста точно не стоит.

Где можно сдать анализ на сифилис?

Заказать исследование биоматериала на сифилис можно:

в любой поликлинике;

частной клинике;

лаборатории.

Преимущество бюджетных учреждений состоит в том, что там эта услуга бесплатна. Существенный минус заключается во времени ожидания анализа, слабом материально-техническом обеспечении некоторых государственных поликлиник и в том, что если сифилис выявят, то скрыть этот факт будет затруднительно.

Частные клиники и лаборатории согласны работать с пациентами на условиях конфиденциальности. Это подойдет тем, кто не хотел бы, чтобы о его заболевании стало известно. Но следует помнить, что бланк с результатом, где не фигурирует имя пациента, не подлежит приему ни в одной организации.

Разумеется, за анализ в частном учреждении придется заплатить, но и результат можно будет узнать через 2-3 дня. Более того, многие клиники без проблем предлагают экспресс-тестирование и сообщают о результатах анализов уже через пару часов.

Сколько стоит сдать анализ на сифилис?

Ценник на анализ зависит от его вида. Скрининговое исследование обойдется пациенту в 300-400 рублей . Анализ, при котором определяют наличие ДНК в том или ином типе биоматериала, будет стоить в районе 500 рублей.

Разумеется, цены варьируются в зависимости от лабораторий, используемых материалов и итоговой точности самого теста. В этом случае нередко работает правило, согласно которому чем тест дороже, тем он точнее.

Сифилис - коварное заболевание, которое медленно, но верно не только уничтожает внутренние органы, но и затрагивает всю нервную систему человека. К счастью, эта болезнь развивается неспешными темпами, а наука выявила эффективные методы борьбы с ней еще в то время, когда изобрела пенициллин, к которому трепонемы уязвимы до сих пор. Так что главное - вовремя пройти качественное обследование, а после этого обратиться к знающему врачу.

Также вы можете посмотреть видео в этой статье, где врач расскажет вам о РИФ анализе на сифилис.

В статье будет подробно разъяснено о тех методиках, которые направлены на идентификацию возбудителя сифилиса, о проведении анализов, их чувствительности, и что самое важное – специфичности для спирохеты. Короткое введение в особенности строения и антигенного состава бледной трепонемы, отмеченные вначале статьи, позволят понять диагностические методы, описанные далее.

Методы диагностики сифилиса представляют собой то, с помощью которого мы можем обнаружить сифилис – циклически протекающее заболевание, передающееся половым путем, возбудителем которого является бледная трепонема. Наверняка, каждый слышал о нем, и о реакции Вассермана, но об ее особенностях и применении сегодня мы поговорим несколько позже.

Кроме первичной, вторичной и третичной форм сифилиса существует и его латентное течение, при котором явные симптомы отсутствуют, развивается «затишье», однако заболевание не исчезает. Данный этап опасен из-за низкой частоты диагностики, но высокого шанса на активизацию процесса, но уже с новыми силами. Потому охват более широкого числа людей для диагностики помогает обнаружить даже «скрывшуюся» на первый взгляд болезнь.

Бледная трепонема – извитой формы микроорганизм, который при рассмотрении его под микроскопом, напоминает дождевого червя. Завитки позволяют ей вращаться вокруг своей оси и совершать ряд поступательных движений. «Бледной» спирохету сделала плохая окраска анилиновыми красителями.

Большинство микроорганизмов есть возможность культивировать на искусственно созданных питательных средах, как вирус гриппа на куриных эмбрионах, или возбудитель шанкроида на шоколадном агаре. Бледная спирохета не является из числа таковых.

Ее естественная среда обитания – человек. Потому, так как диагностировать сифилис путем выращивания культуры не удается, был изобретен ряд других методик, позволяющих подтвердить ее наличие в организме человека.

Возбудитель сифилиса является малоустойчивым организмом, в связи, с чем вне среды организма человека погибает довольно быстро. Путь заражения в подавляющем большинстве половой, однако, может быть трансплацентарным (от матери к ребенку) и контактным, чаще встречающимся среди медицинского персонала. Входными воротами являются слизистые оболочки, где на месте внедрения спирохета образует язву – твердый шанкр.

Бледная трепонема имеет способность к генерализации в организме человека, благодаря чему мы знакомы с клиникой сифилиса такой, какая она есть. Образование сифилитических гумм характеризует заболевание как специфический вид воспаления и способно тяжело поражать различные системы органов, включая ЦНС, кардиоваскулярную систему, органы чувств и так далее.

Лабораторная диагностика сифилиса, а что еще важнее – ее соответствующее применение и правильная интерпретация важны как для раннего обнаружения болезни, так и для подбора оптимальной терапии.

Кого будем проверять?

Диагностировать можно как пациентов с явными и не очень симптомами заболевания, так и совершенно бессимптомных индивидуумов.

Как определить, кого направить на диагностику? Очень просто – первая группа (симптоматическая) в любом случае требует проведения ряда анализов, вторая – касается лишь людей, относящихся к группе повышенного риска.

Высокая степень риска носительства бледной трепонемы присуща следующим категориям людей:

пациенты, чей половой партнер был диагностирован ранее с сифилисом;
лица нетрадиционной ориентации;
пациенты с положительным ВИЧ статусом;
анамнез жизни, отягощенный тюремным заключением или работой, связанной с предоставлением секс-услуг.

Внимание! В обязательном порядке скринингу на сифилис подлежат все беременные женщины при постановке их на учет, независимо от степени риска. Такой подход направлен на снижение частоты встречаемости врожденных форм сифилиса за счет ранней его диагностики.

Диагностические тесты

Серологическая диагностика сифилиса – самый распространенный метод его обнаружения, обеспечивает нас предположительным диагнозом. Выделяют нетрепонемные и трепонемные тесты.

Изолированное использование только одного вида анализов не позволяет подтвердить диагноз из-за достаточно высокой частоты ложноположительных результатов.

Кроме всего прочего, серодиагностика сифилиса базируется на гуморальном иммунном ответе организма на инфекцию. Так, пациенты с заведомо известной иммунной супрессией, имеют немалый шанс получения ложноотрицательных результатов анализов.

Нетрепонемные тесты . Их действие основано на реакции сыворотки инфицированного человека на сифилитические антигены. Традиционно они используются только для первичного скрининга из-за своей неточности и неспецифичности. Однако благодаря им есть возможность выделить группу людей повышенного риска для наличия сифилитической инфекции.

Положительными сторонами использования являются их низкая цена, легкость в исполнении и возможность количественной оценки, применяемой для определения ответной реакции организма на проводимое лечение. Нетрепонемные тесты включают в себя такие методики, как RPR (rapid plasma reagin test) – анализ быстрых реагинов, VDRL (venereal disease research laboratory) – реакция микропреципитации, а также TRUST-тест.

Положительный результат исчисляется в титрах антител к бледной трепонеме, циркулирующих в организме человека (как IgM, так и IgG). Даже при отсутствии специфической терапии титры имеют особенность ослабевать, однако применение антисифилитического лечения приводит к значительному снижению титров антител, и потому может быть использовано как качественный индикатор эффективности терапии. О применении данных тестов рассказано также в видео в этой статье.

Трепонемные тесты . Данная группа анализов является более финансово затратной, а также значительно сложней в исполнении, по сравнению с нетрепонемными тестами. Традиционно они используются как подтверждающий метод при положительном результате скринингового метода.
Специфические трепонемные тесты включают в себя реакции иммунной флюоресценции, РПГА (реакция прямой гемагглютинации), ИФА (иммуноферментный анализ), а также реакция иммобилизации трепонем.

Данная группа анализов направлена на обнаружение специфических антител, направленных на определенные антигены бледной спирохеты, за счет чего считаются более достоверными. В отличие от нетрепонемных тестов, результаты анализов данной группы исключительно качественные, а не количественные.

Важно! Большинство таких тестов не различают результат между впервые диагностированным, и ранее перенесенным заболеванием, так как направлены на обнаружение антител, которые сохраняются в организме даже после полноценного лечения.

Прямые методы диагностики . Не смотря на то, что микроорганизм невозможно культивировать искусственно, это не мешает его визуализировать. Для этого используется микроскопия в темном поле и прямая реакция иммунофлюоресценции (DFA, direct fluorescent antibody testing). Однако ни один из этих тестов не распространен повсеместно, так как требует специального оборудования для проведения диагностики.

Внимание! Микроскопия в темном поле – это не только достоверный анализ, но и экспресс метод диагностики сифилиса, которым можно исследовать любые среды, выделенные из сифилитических повреждений.

Также все более широко начинает использоваться ПЦР (полимеразная цепная реакция), смысл которой заключается в обнаружении ДНК спирохеты. Специфичность такого теста достигает до 98%, однако достаточно широкое внедрение данного метода ограничено финансовыми вопросами, так как ПЦР – достаточно дорогостоящий анализ.

Подход в диагностике реального пациента

Одно дело разобрать, какие тесты используются в обнаружении сифилиса, и совсем другие – понять, что делать с пациентом с вероятным диагнозом «сифилис», а именно – что говорит инструкция, алгоритм назначения диагностических мероприятий.

Первым этапом лабораторной диагностики является серология, а именно нетрепонемные тесты. Несмотря на недостаточную специфичность, с их помощью можно определить – требуется для данного конкретного человека дальнейшее обследование.

Чаще с этой целью используют тест быстрых реагинов (RPR). Положительный результат переводит к следующему этапу – более специфичному трепонемному тесту, например ИФА (наиболее используемому) или РИФ.

Важно! Отрицательный результат первичного исследования у бессимптомных пациентов не требует последующих анализов.

Интерпретация серологических тестов

Правильное заключение результат зависит на клинических проявлениях заболевания у пациента, его иммунного статуса, наличия коморбидных патологий, истории сифилиса ранее в течение жизни.

Итак:

Положительный нетрепонемный и положительный трепонемный . Такая комбинация у человека, ранее не переносившего сифилис является достоверным первичным диагнозом «сифилис», который требует лечения и детальной оценки с целью определения стадийности заболевания. В свою очередь, пациент, анамнез жизни которого отягощен данной патологией в прошлом, требует более тщательного обследования. Врач в таком случае должен полагаться также на данные физикального обследования и титры нетрепонемного теста.
Позитивный нетрепонемный и негативный трепонемный . Подобного рода комбинация в случае диагностики сифилиса чаще характеризует ложноположительный результат тестирования пациента. Получению такого ответа при исследовании может способствовать имеющийся в организме аутоиммунный процесс (например, СКВ), острый период болезни (эндокардит), хронические заболевания печени, иммунизация, проведенная незадолго до диагностики сифилиса.
Отрицательный нетрепонемный и положительный трепонемный. Данная картина наиболее характерна для пациента, эффективно вылечившего ранее существующий у него сифилис, при котором остались специфический для бледной трепонемы антитела. Для такого человека обследования на сифилис на этом заканчиваются, и тест считается отрицательным на момент проведения тестирования. Если же анамнез по сифилису такого пациента не отягощен, дальнейшее обследование требует детализации, направленного на поиск признаков сифилиса, оценки факторов риска для конкретного больного.
Отрицательная серология . Среди людей с прогрессивными формами угнетения иммунного ответа (чаще это пациенты уже с развитым СПИДом) встречаются случаи ложноотрицательных анализов за счет недостаточного ответа иммунной системы на поступивший антиген.

Важно! Ложноотрицательный результат у пациента с явными симптомами первичного сифилиса возможен в случае, если серологическая диагностика проводилась в то время, когда еще не успели выработаться антитела.

Вариант латентного течения сифилиса в свою очередь требует особого внимания. Положительная серология в комплексе с отсутствием каких-либо видимых признаков инфекции создает проблему для врача.

Необходимо определить – это ложноположительный результат и есть сопутствующая патология, являющаяся тому причиной, или это скрытое течение сифилиса.

Каждый подобный клинический случай врач рассматривает индивидуально, так как есть необходимость решить главный вопрос – требуется ли лечение для данного больного.

Информирование пациентов

Широкое информирование людей о том, как можно заразиться бледной трепонемой, как обезопасить себя от инфицирования, как диагностируется сифилис – важные шаги, направленные на предупреждение распространения заболевания.

Методы защиты, используемые при половых контактах любого рода – важный фактор здоровой жизни. Такие вещи должны объясняться людям, начиная со средних-старших классов, так как подобного рода вопросы очень редко затрагиваются дома.

В заключении важно отметить, что, как и в любом заболевании – ранее выявлении прямо пропорционально эффективному лечению, а предупреждение его поможет уберечь не только себя, но и окружающих людей.

Частые вопросы врачу

Желание пациента

Здравствуйте! Зовут меня Игорь, мне 29 лет. Интересует, где проводится экспресс-диагностика сифилиса, и есть ли возможность пройти ее без направления? Прочел, что множество бывает случаев латентного течения болезни. Хотелось бы самостоятельно пройти тестирование.

Добрый день, Игорь. Спасибо за Ваш вопрос. Действительно, в последнее время все чаще поднимается вопрос заболеваний, передающихся половым путем, все меньше умалчивается данная тема.

Распространяются «выездные» лаборатории, которые осуществляют анонимную скрининговую диагностику людей, зачастую даже бесплатную. Вы можете узнать о наличии подобной лаборатории в своем городе, или обратиться в частную лабораторию с целью диагностики.