Biyomateryallerin PCR ile incelenmesi. PCR ile enfeksiyonların teşhisi. Enfeksiyonların teşhisi ne kadar doğrudur?

Giderek, tıbbi uygulamada kullanılmaya başlandı yeni yöntem teşhis bulaşıcı hastalıklar, PCR kısaltmasına sahiptir. Bu araştırma yönteminin özü nedir ve bu sayede hangi hastalıkların tespit edilebileceği, diğer yaygın teşhis yöntemlerine kıyasla PCR'nin avantajları nelerdir ve analiz için nasıl uygun şekilde hazırlanacağını bu makaleyi okuyarak öğrenebilirsiniz. .

PCR nedir?

Kısaltma PCR, polimeraz zincir reaksiyonu anlamına gelir. Bu, bir DNA segmentinin ne zaman orantılı olarak çoğalma yeteneğidir? gerekli koşullar. Enfeksiyonların PCR teşhisi 1980'lerde icat edildi. Avrupalı, Amerikalı ve Sovyet bilim adamları keşif üzerinde çalıştı, bu nedenle yenilikçi teşhis yönteminin öncüsünü belirlemek mümkün değil. Ayrıca PCR gibi bulaşıcı hastalıkların araştırılmasına yönelik böyle bir yöntemin resmi olarak tescil edildiği 1983 yılından bu yana bu yöntemi geliştirmeye yönelik çalışmalar devam etmektedir. Günümüzde bu teşhis yöntemi, gerekli modern donanıma sahip hemen hemen her tıbbi laboratuvarda kullanılmaktadır.

Analiz nasıl yapılır?

PCR analizi için, bağlı olarak tıbbi endikasyonlar Kan, tükürük, idrar, semen, anne sütü veya genital salgılar gibi materyallerden tıbbi numune almanın gerekli olması, epitel hücreleri. PCR ile enfeksiyonların teşhisi, test materyalindeki patojenin DNA'sını tespit etmektir. Kimyasal reaktifler ve ekipman kullanan özel laboratuvar manipülasyonlarının yardımıyla, laboratuvar asistanları bir polimeraz zincir reaksiyonu gerçekleştirir. Onun yardımıyla, patojenin DNA'sının mikroskopta görünmeyen bir kısmı, cihazda fark edilebilecek boyutlara kadar büyür. Bu nedenle, test materyalinde DNA'sının önemsiz bir bölümü olsa bile enfeksiyona neden olan ajanı tespit etmek mümkündür.

PCR ile hangi enfeksiyonlar saptanabilir?

Enfeksiyonların PCR teşhisi ile bir dizi patojenik mikroorganizmayı tespit edebilir. Sonuçların yorumlanması, patojenin saptanmasına ve türünün belirlenmesine indirgenmiştir. Teşhis için polimeraz zincir reaksiyonu kullanılır. çeşitli hastalıklar insan: cinsel yolla bulaşandan asemptomatik olana, sözde gizli enfeksiyonlar. PCR şunları bulur:

• hepatit virüsü (A, B, C);
• ureplasma urealiticum;
• ureplasma parvum;
• klamidya enfeksiyonları;
• kandida
• mikoplazma hominis;
• mikoplazma genitalyumu;
• garganella vajinalis;
• trichomoniasis;
• Tüberküloz;
• herpes simpleks virüsü tip 1 ve 2;
• papilloma virüsü;
• Epshetain-Barr virüsü;
• Helikobakter pilori;
• immün yetmezlik virüsü.

Yukarıdaki mikroorganizmalar hepatit, tüberküloz, CYBE ve AIDS gibi hastalıklara neden olur.

Enfeksiyonların PCR teşhisi, kalitatif (yani, bir patojenin varlığı veya yokluğu belirlenir) ve kantitatif analiz (vücuttaki bir mikropun sayısı hesaplanır - bu yaklaşım gereklidir, örneğin, HIV enfeksiyonları ve hepatit tanısında).

Teşhis yönteminin avantajları

Günümüzde hemen hemen her laboratuvar insan enfeksiyonlarını polimeraz zincir reaksiyonu kullanarak teşhis etmektedir. Bu yöntemin avantajları nelerdir, neden bu kadar kısa sürede hem hekimler hem de hastalar arasında inanılmaz popüler hale gelmiştir? Yenilikçi teknolojinin bu kadar hızlı yayılması, yüksek düzeyde güvenilirlik, verimlilik ve hassasiyetle açıklanmaktadır. PCR teşhis yönteminin avantajlarını daha ayrıntılı olarak ele alalım:

1. Analiz süreci mümkün olduğu kadar otomatikleştirilir, bu da çalışma ve sonucun yorumlanması sırasında insan faktörünü ortadan kaldırır.
2. Sayesinde modern teknolojiler kültürler 4-6 saat içinde ürer ve buna göre materyalin araştırmaya teslim edildiği gün analiz sonucunu alabilirsiniz.
3. Enfeksiyonların PCR teşhisi oldukça hassastır, bu da küçük bir DNA parçasının varlığında bile patojenin tespit edilmesini mümkün kılar. Bazı durumlarda, örneğin, halsiz ve asemptomatik hastalıklarda, mahsulleri başka bir yöntemle ekmek zordur veya tamamen imkansızdır.
4. PCR araştırması için materyal kan, tükürük, ürogenital salgılar, epitel hücreleri, idrar, meni olabilir ve bu, analiz için belirli materyalleri almanın imkansız olduğu durumlarda son derece uygundur. Enfeksiyöz hastalıkları teşhis etmek için yaygın olarak kullanılır venöz kan ve ürogenital yayma.
5. Polimeraz zincir reaksiyonu yöntemi, aynı malzemeden birkaç patojeni tanımlayabilir. Bu yaklaşım yalnızca çözüm süresini azaltmakla kalmaz doğru teşhis aynı zamanda araştırma maliyetlerinden de tasarruf sağlar.
6. Yalnızca az sayıda yanlış negatif sonuç kaydedildiği için PCR yöntemi güvenilir kabul edilir. Bugüne kadar hiçbir yanlış pozitif yanıt kaydedilmemiştir.

PCR teşhisi ne zaman kullanılır?

Enfeksiyonların PCR teşhisinin avantajları ne olursa olsun, bu yöntem her zaman kullanılmaz. Örneğin, toksoplazmoz teşhisi konulurken, yalnızca ELISA analizi şüpheli veya tartışmalı bir sonuç gösterdiğinde bir polimeraz zincir reaksiyonu gerçekleştirilir. PCR yöntemini kullanarak hastalığın dinamiklerini izlemek imkansızdır. Not aşağıdaki durumlar bu araştırma yönteminin güvenilir ve etkili sonuçlar getireceği durumlarda:

• yukarıda maddenin ilgili bölümünde belirtilen bulaşıcı hastalıkları belirlemek;
• ürogenital enfeksiyonların yaygın PCR teşhisi;
• hamilelik sırasında CYBE belirlemek için;
• HIV teşhisi için;
• tartışmalı tıbbi durumlarda bir ön teşhisi doğrulamak veya reddetmek;
• babalık ve aile bağlarını belirlemek;
• kalıtsal yatkınlıkları tespit etmek için genotiplemede kullanılır;
• PCR yöntemi, adli tıp departmanı çalışanlarının genetik materyali tanımlamasına yardımcı olur.

Hamilelik sırasında PCR

Bu amaçla kayıt yaptıran hamile bir kadın için PCR yöntemiyle muayene zorunludur. erken tanı cinsel yolla bulaşan enfeksiyonlar. Bu tür hastalıklar, çocuk doğurma döneminin normal seyri için son derece tehlikeli olduğundan. STI'ler fetal gelişimde solmaya, düşüklere, intrauterin deformitelere, ölü doğumlara, konjenital patolojilere neden olur. Enfeksiyonun zamanında tespiti ve tedavisi, hamileliğin olumlu sonuçlanma ve sağlıklı bir bebeğin doğum şansını önemli ölçüde artırır.

Genellikle anne adayı görevlendirilmiş Kapsamlı sınav, adı "PCR 6" olan. Böyle bir çalışma 6 farklı enfeksiyonun analizini içerir. PCR teşhisi hem kamu hem de özel kurumlarda yapılmaktadır: Invitro, Happy Family, Uro-Pro ve diğer laboratuvarlar bu hizmeti vermektedir. Bu sorun aşağıda daha ayrıntılı olarak açıklanmaktadır.

Bu nedenle, materyali analiz için yalnızca bir kez almak gerekli olacaktır. Hamilelik sırasında PCR teşhisi yapılırken, jinekolojik bir fırça ile servikal kanaldan alınan bir ürogenital sürüntü gereklidir. Bu prosedür ağrı hamile bir kadında ve fetüsü hiçbir şekilde etkilemez.

Hepatit belirlemek için PCR

PCR teşhisi genellikle hepatite neden olan ajanı tespit etmek için reçete edilir. Bu, böyle bir hastalığın genellikle asemptomatik olması ve kronik, şiddetli, inatçı bir aşamaya geçmesiyle açıklanmaktadır. PCR yardımıyla, hepatit en erken aşamalarda tespit edilir ve bu da mümkün olan en kısa sürede uygun bir tedaviye katkıda bulunur. Enfeksiyonların bu tür PCR teşhisi çoğu özel laboratuvarda gerçekleştirilir. Fiyat, tespit edilen virüs tipine ve analiz tipine bağlıdır. Bu nedenle, kanda patojen DNA'nın varlığının veya yokluğunun basit bir tespiti 400-600 rubleye mal olur. Kantitatif yöntem 1200-1500 rubleye mal olacak.

Kapsamlı PCR çalışması

PCR yönteminin bulaşıcı hastalıkların teşhisinde daha da etkin olması için yaygın olarak kullanılmaktadır. Kapsamlı çalışma, tanı ve zamanında tedavi süresini azaltmaya yardımcı olur. Bu nedenle laboratuvarlar "PCR-6" ve "PCR-12" analizlerini sunmaktadır. İlk kompleks, aşağıdakiler gibi genital enfeksiyonların PCR teşhisini içerir:

• üroplazmoz;
• klamidya;
• mikoplazmoz;
• insan papilloma virüsü;
• basit uçuk;
• sitomegalovirüs.

Böyle bir çalışma genellikle kadınlara atanır. erken tarihler hamilelik ve gebe kalmanın planlanması sırasında.

"PCR-12" sırasında yukarıdaki hastalıklara ek olarak aşağıdakiler teşhis edilir:

• belsoğukluğu;
• kandidiyazis;
• bakteriyel vajinoz;
• trichomoniasis;
• üroplazmoz;
• uçuk 1 ve 2 türleri.

Laboratuvara bağlı olarak, komplekste yer alan incelenen hastalıkların listesi değişebilir. Doktor her birini seçecek özel durum en uygun muayene. Her durumda, PCR ile kapsamlı bir analiz çok daha az zaman, çaba ve malzeme maliyeti alacaktır.

Enfeksiyonların PCR teşhisi: nasıl geçilir?

PCR analizi için hazırlık, belirli bir materyal türünün toplanmasına yönelik tavsiyelerin izlenmesinden oluşur:

1. Ürogenital yayma yapılırken, amaçlanan analizden üç gün önce cinsel temastan kaçınılmalı, antibakteriyel ilaçlar ve lokal merhemler, kremler, fitiller, duşlar yapılmamalıdır. Adet akışı sırasında, materyal örneklemesi yapılmaz - adetin bitiminden en geç 3 gün sonra bir analiz yapılması gerekir. Analizden 3 saat önce idrar yapmaktan kaçınmalısınız.
2. Sabahları aç karnına venöz kan bağışlamak daha iyidir (bu kural olmasa da). Bir gün öncesinden alkol ve yağlı yiyeceklerin tüketimini sınırlandırmalısınız.
3. Sperm bağışlarken üç gün boyunca cinsel temastan kaçınmalısınız. Alkol kullanımını sınırlamanız, saunayı ziyaret etmeniz, sıcak bir banyo yapmanız önerilir.
4. İdrar, cinsel organların iyice yıkanmasından sonra sabah alınmalıdır. Malzemeyi özel steril bir kapta toplamak daha iyidir. Materyal birkaç saat içinde laboratuvara teslim edilmelidir.

Sonuç nasıl çözülür?

Enfeksiyonların PCR teşhisi yapıldıktan sonra sonuçları yorumlamak zor değildir. Kalitatif yöntemin deşifre edilmesi, test materyalinde bir patojenin varlığının veya yokluğunun değerlendirilmesinin yanı sıra patojenik mikroorganizma tipinin belirlenmesinden oluşur. Test materyalinde bir mikrobun DNA'sının bir kısmı bulunursa, pozitif sonuç ilgili forma kaydedilir ve hangi mikrop tipinin belirlendiği de belirtilir. Malzemede patojen bir mikroorganizma bulunmaması durumunda sonuç negatif olacaktır.

Örneğin hepatit tanısında kantitatif bir analizin sonuçları, laboratuvar tarafından belirlenen standartlar kullanılarak deşifre edilmelidir. Ölçüm birimleri ve niceliksel faktör, farklı tıbbi teşhis kurumlarında önemli ölçüde farklılık gösterdiğinden. Güvenilir bir şekilde, eşlik eden tüm faktörleri hesaba katarak, böyle bir analizi yalnızca bir doktor deşifre edebilir.

Son zamanlarda, güvenilir, son derece hassas ve hızlı yöntemçeşitli insan bulaşıcı hastalıklarının teşhisi. Bu yönteme "PCR analizi" denir. özünü, hangi mikroorganizmaları ortaya çıkarabileceğini ve doğru şekilde nasıl alınacağını yazımızda anlatacağız.

keşif geçmişi

Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) yöntemi, 1983 yılında Amerikalı bilim adamı Kary Mullis tarafından icat edildi. İlk olarak, yaratıcısının çalıştığı Cetus Corporation tarafından patentlendi. Ancak 1992'de tüm haklar ve patentler Hoffman-La Roche'a satıldı. Bundan sonra, benzer çalışmaların paralel olarak yürütüldüğü ve Alice Chen, David Edgar, John Trell gibi diğer Amerikalı biyologlar tarafından kaydedildiği ortaya çıktı. 1980'de Sovyet bilim adamları A. Slyusarenko, A. Kaledin de bu sorunu ele aldı ve bu nedenle tek telif sahibinin belirlenmesi imkansız hale geldi. Pek çok ünlü biyokimyacı, polimeraz reaksiyonunun gelişimine belirli bir katkı yaptı ve yeniliklerinin patentini aldı. Şu anda özel donanımlı laboratuvarlarda her yerde PCR analizi yapılıyor.

PCR teşhis yönteminin özü

PCR analizi: nedir ve nasıl çalışır? Yöntemin özü, özel bir DNA polimeraz enzimi kullanarak yapay koşullar altında belirli bir mikrobiyal ortamın hacmini arttırmaktır. Bunun için var olan DNA materyali defalarca çoğaltılır. Böylece örnekte patojen bir mikroorganizmanın varlığında biyokimyasal laboratuvar manipülasyonları nedeniyle sayısı artacak ve mikroskop altında bakterinin saptanması zor olmayacaktır.

Malzeme araştırması nasıl yapılır?

Analiz şunları gerektirir:

PCR gerçekleştirmek için üç aşamadan oluşan 25-30 tekrar gerçekleştirilir: denatürasyon, tavlama ve uzama.

Polimer zincir reaksiyonunun analizi için özel bir cihaz kullanılır - bir amplifikatör. Modern ekipman, teşhis sırasındaki hataları ortadan kaldırmak için test tüplerini ısıtmak ve soğutmak için gerekli programı ayarlamanıza olanak tanır.

Teşhis nerede kullanılır?

Polimer zincir reaksiyonu yöntemi tıbbın çeşitli alanlarında kullanılmaktadır:

• adli tıp bilim adamları bunu saç, tükürük veya kan gibi genetik materyali tanımlamak için kullanır;
• bir PCR kan testi, örneğin belirli bir ilaca karşı bireysel genetik olarak doğal bir reaksiyonu tespit etmek için genotiplemeye yardımcı olur;
• bu yöntemle insanlar arasında aile bağlarının varlığı kurulur;
• Son zamanlarda en popüler PCR yöntemi haline geldi. tıbbi teşhisÇeşitli bulaşıcı hastalıkları tanımlamak için.

PCR ile hangi enfeksiyonlar tespit edilir?

Bu nedenle, tıp uzun süredir ve başarılı bir şekilde PCR analizini kullanmıştır. Ne olduğunu zaten biliyoruz. Ve onunla hangi patojenler tespit edilebilir? Aşağıdakiler PCR ile teşhis edilir:

Ayrıca kanser tanısında PCR yöntemleri kullanılmaktadır.

yöntemin avantajları

PCR teşhisinin birkaç avantajı vardır:

Sonuçların güvenilir olması için PCR çalışmaları, teşhis için ön hazırlık önerilerini izleyerek analizi geçmeniz gerekir:

1. Tükürük vermeden önce, materyali almadan 4 saat önce yemek yemekten ve ilaç almaktan kaçınmalısınız. İşlemden hemen önce ağzınızı kaynamış su ile çalkalayın.
2. Yanak iç yüzeyinden numune alınırken de yukarıdaki kurallara uyulmalıdır. Durulandıktan sonra bezin sırrını ortaya çıkarmak için hafif bir cilt masajı yapılması tavsiye edilir.
3. İdrar genellikle evde toplanır. Bunu yapmak için, cinsel organların kapsamlı bir tuvaletini yapmanız gerekir. 50-60 ml idrarı steril bir plastik kapta toplayın. Malzemenin saflığını sağlamak için kadınların vajinaya tampon sokması, erkeklerin ise deri kıvrımını mümkün olduğunca çekmesi önerilir. Adet akışı sırasında malzemeyi alamazsınız.
4. Sperm bağışlamak için materyali almadan önce 3 gün cinsel ilişkiden kaçınmalısınız. Doktorlar ayrıca saunaya gitmeyi ve sıcak banyo yapmayı, alkollü ve baharatlı yiyecekler içmemeyi tavsiye ediyor. Analizden 3 saat önce idrar yapmaktan kaçınmanız gerekir.
5. Ürogenital smear verilmesi için örneğin klamidya için PCR testi yapılırsa hem kadınlara hem de erkeklere 3 gün cinsel istirahat tavsiye edilir. 2 hafta önce tahlil alınamaz antibakteriyel ilaçlar. Bir hafta içinde kullanmayı bırakın samimi jeller, merhemler, vajinal fitiller, duş. Muayeneden 3 saat önce idrar yapmaktan kaçınmalısınız. Menstrüasyon sırasında, kesildikten sadece 3 gün sonra materyal örneklemesi yapılmaz. kan salgılarıürogenital smear alabilirsiniz.

Hamilelik sırasında PCR

Bir bebeği beklerken, cinsel yolla bulaşan birçok enfeksiyon, fetüsün normal gelişimi için son derece tehlikelidir. STD'ler, intrauterin büyüme geriliği, düşük veya erken doğum, çocuğun konjenital malformasyonlarını tetikleyebilir. Bu nedenle, hamileliğin erken döneminde PCR muayenesinden geçmek son derece önemlidir. Kayıt sırasında analizi geçmek gerekir - 12 haftaya kadar.

Materyal özel bir fırça kullanılarak servikal kanaldan alınır. İşlem ağrısızdır ve bebek için tehlike oluşturmaz. Genellikle hamilelik sırasında, PCR yöntemiyle klamidya ve ayrıca üreaplasmoz, mikoplazmoz, sitomegalovirüs, herpes, papilloma virüsü için bir analiz yapılır. Böyle bir inceleme kompleksine PCR-6 denir.

HIV teşhisi için PCR

Polimeraz zincir reaksiyonu yönteminin vücuttaki değişikliklere ve teşhis koşullarına çok duyarlı olması nedeniyle birçok faktör sonuca etki edebilmektedir. Bu nedenle HIV enfeksiyonu için PCR analizi güvenilir bir yöntem değildir, etkinliği %96-98'dir. Vakaların geri kalan %2-4'ünde test yanlış pozitif sonuç verir.

Ancak bazı durumlarda, HIV'in PCR teşhisi olmadan kimse yapamaz. Genellikle yanlış negatif ELISA sonucu olan kişilere verilir. Bu tür göstergeler, bir kişinin henüz virüse karşı antikor geliştirmediğini ve sayı birden fazla artış olmadan tespit edilemeyeceğini gösterir. PCR yöntemi kullanılarak bir kan testi yapılarak tam olarak elde edilebilecek şey budur.

Bu tür teşhisler, HIV pozitif bir anneden doğan, yaşamın ilk yılındaki çocuklar için de gereklidir. Yöntem, bir çocuğun durumunu güvenilir bir şekilde belirlemenin tek yoludur.

Hepatit teşhisi için PCR

Polimeraz zincir reaksiyonu yöntemi, enfeksiyona karşı antikorların oluşmasından veya hastalık semptomlarının başlamasından çok önce hepatit A, B, C virüsünün DNA'sının tespit edilmesini mümkün kılar. Hepatit C için PCR analizi özellikle etkilidir, çünkü vakaların% 85'inde bu hastalık asemptomatiktir ve zamanında tedavi olmaksızın kronik aşamaya geçer.

Patojenin zamanında tespiti, komplikasyonlardan ve uzun süreli tedaviden kaçınmaya yardımcı olacaktır.

Kapsamlı PCR incelemesi

Kapsamlı PCR analizi: birkaç enfeksiyon türünün aynı anda belirlenmesini içeren polimerik zincir reaksiyonu yöntemiyle inceleme: mikoplazma genitalium, mikoplazma hominis, gardnerella vajinalis, kandida, Trichomonas, sitomegalovirüs, herpes tip 1 ve 2, gonore, papilloma virüsü. Bu tür teşhislerin fiyatı 2000 ila 3500 ruble arasında değişmektedir. kliniğe, kullanılan malzeme ve ekipmana ve ayrıca analiz türüne bağlı olarak: kalitatif veya kantitatif. Sizin durumunuzda neyin gerekli olduğuna doktor karar verecektir. Bazı durumlarda, sadece patojenin varlığını belirlemek yeterlidir, diğerlerinde, örneğin HIV enfeksiyonu ile, kantitatif bir titre önemli bir rol oynar. Yukarıdaki patojenlerin tümünün teşhisi yapılırken yapılan incelemeye "PCR-12 analizi" adı verilir.

Analiz sonuçlarının deşifre edilmesi

PCR analizinin deşifre edilmesi zor değildir. Göstergenin yalnızca 2 ölçeği vardır - "olumlu sonuç" ve "olumsuz sonuç". Bir patojen tespit edildiğinde, doktorlar hastalığın varlığını %99 kesinlikle doğrulayabilir ve hastayı tedavi etmeye başlayabilir. Enfeksiyonu belirlemek için kantitatif bir yöntemle ilgili sütun, tespit edilen bakterilerin sayısal göstergesini gösterecektir. Sadece bir doktor hastalığın derecesini belirleyebilir ve gerekli tedaviyi önerebilir.

Bazı durumlarda, örneğin, HIV enfeksiyonunu PCR ile negatif sonuçla belirlerken, elde edilen göstergeleri doğrulamak için ek muayeneler yapmak gerekli hale gelir.

Analizi nereye götürmeli?

PCR analizi nerede yapılır: içinde devlet polikliniği Yoksa özel bir laboratuvarda mı? Ne yazık ki, belediye sağlık kurumlarında ekipman ve yöntemler genellikle eskidir. Bu nedenle, modern donanıma ve kalifiye personele sahip özel laboratuvarları tercih etmek daha iyidir. ayrıca içinde özel klinikçok daha hızlı sonuç alırsınız.

Moskova'da birçok özel laboratuvar, çeşitli enfeksiyonlar için PCR analizi sunmaktadır. Örneğin Vita, Complex Clinic, Happy Family, Uro-Pro gibi kliniklerde PCR analizi yapılmaktadır. Muayenenin fiyatı 200 ruble. Tek bir patojenin tanımlanması için.

Çoğu durumda bulaşıcı hastalıkların PCR ile teşhisinin, enfeksiyonun erken evrelerinde vücuttaki patojeni tespit etmenin hızlı ve güvenilir bir yolu olduğu sonucuna varılabilir. Ancak yine de, bazı durumlarda diğer teşhis yöntemlerini seçmeye değer. Böyle bir çalışmanın gerekliliğini yalnızca bir uzman belirleyebilir. PCR analizinin deşifre edilmesi de profesyonel bir yaklaşım gerektirir. Doktorunuzun talimatlarına uyun ve ihtiyacınız olmayan testleri yapmayın.