Značenja i definicije Coombsovog suđenja. Izravno ispitivanje češljeva

- antiglobulinski test čiji je cilj otkrivanje u Rh negativnoj krvi nepotpunih antieritrocitnih protutijela na Rh faktor - specifični protein koji se nalazi na površini eritrocita Rh pozitivne krvi. Postoje dvije vrste ovog testa: izravni - otkrivanje protutijela na površini crvenih krvnih stanica, neizravni - otkrivanje protutijela u krvnom serumu. Direktan test se provodi u dijagnostici i praćenju liječenja bolesti krvi: hemolitička anemija, hemolitička bolest novorođenčad i drugi. Provodi se neizravni test za procjenu kompatibilnosti krvi davatelja i primatelja tijekom transfuzije, kao i za određivanje prisutnosti i rizika od Rh sukoba pri planiranju i vođenju trudnoće. Materijal za Coombsov test je deoksigenirana krv, studija se provodi metodama koje se temelje na reakciji aglutinacije. Obično oba testa daju negativan rezultat. Analiza se provodi unutar jednog dana.

Coombsov test - Kliničko ispitivanje Rh-negativna krv, usmjerena na otkrivanje antitijela na Rh faktor. Test se koristi za prepoznavanje rizika od razvoja Rhesus sukoba i hemolitičkih reakcija. U svakoj osobi površina eritrocita sadrži određeni skup antigena ili aglutinogena - spojeva različite prirode, po čijoj se prisutnosti ili odsutnosti prosuđuje krvna grupa i Rh faktor. Postoje mnoge vrste antigena, au medicinskoj praksi najveći praktični značaj imaju aglutinogeni A i B koji određuju krvnu grupu, te aglutinogen D, Rh faktor. S pozitivnim Rh faktorom, D antigeni se otkrivaju na vanjskoj membrani eritrocita, s negativnim - ne.

Coombsov test, koji se naziva i antiglobulinski test, usmjeren je na otkrivanje nepotpunih antieritrocitnih antitijela na sustav Rh faktora u krvi. Antitijela na Rh faktor su specifični imunoglobulini koji se stvaraju u Rh negativnoj krvi kada u nju uđu eritrociti s aglutinogenima D. To se može dogoditi pri miješanju krvi fetusa i trudnice, pri čemu se transfuzije krvi provode bez prethodne krvne grupe. Coombsov test postoji u dvije verzije - izravnoj i neizravnoj. Prilikom izvođenja izravnog Coombsovog testa, antitijela se otkrivaju pričvršćena na površinu crvenih krvnih stanica. Studija se koristi za određivanje uzroka hemolitičke reakcije. Indirektni Coombsov test je usmjeren na otkrivanje antieritrocitnih protutijela u krvnoj plazmi. Potrebno je utvrditi kompatibilnost krvi davatelja i primatelja ili majke i fetusa, pomaže u sprječavanju razvoja Rhesus sukoba i naknadne hemolize crvenih krvnih stanica.

Krv za obje varijante Coombsovog testa uzima se iz vene. Analiza se provodi metodom aglutinacije pomoću antiglobulinskog seruma. Rezultati istraživanja koriste se u hematologiji pri utvrđivanju uzroka hemolitičkih reakcija, u kirurgiji i reanimaciji tijekom transfuzije krvi, u opstetriciji i ginekologiji pri praćenju trudnoće kod žena s Rh negativnom krvlju.

Indikacije

Izravni Coombsov test, koji otkriva antitijela pričvršćena na površinu crvenih krvnih stanica, propisan je za hemolitičke reakcije (uništavanje crvenih krvnih stanica) različitog podrijetla. Studija je indicirana za primarnu autoimunu hemolitičku anemiju, posttransfuzijsku hemolitičku anemiju, hemolitičku bolest novorođenčadi, hemolizu eritrocita uzrokovanu autoimunim, neoplastičnim ili zaraznim bolestima, kao i uzimanje lijekovi npr. kinidin, metildopa, prokainamid. Neizravni Coombsov test, koji otkriva antitijela u krvnoj plazmi, koristi se za sprječavanje razvoja Rhesus sukoba. Indiciran je za pacijente koji se pripremaju za transfuziju krvi, kao i za trudnice s negativnim Rh faktorom, pod uvjetom da budući otac djeteta ima pozitivan Rh faktor.

Kako bi se utvrdila Rh kompatibilnost, Coombsov test se ne primjenjuje kod pacijenata s Rh pozitivnom krvlju. U tim slučajevima na površini crvenih krvnih zrnaca već postoje antigeni, stvaranje antitijela ne može biti potaknuto transfuzijom krvi ili ulaskom fetalne krvi u krvotok trudnice. Također, studija nije indicirana za trudnice ako oba roditelja imaju negativan Rh faktor, nasljednu recesivnu osobinu. Dijete u takvim parovima uvijek ima Rh-negativnu krv, imunološki sukob s majkom je nemoguć. U hemolitičkim patologijama, antiglobulinski test se ne koristi za praćenje uspješnosti terapije, budući da rezultati ne odražavaju aktivnost procesa razaranja eritrocita.

Ograničenje Coombsovog testa je složenost postupka istraživanja - za dobivanje pouzdanih rezultata potrebno je pridržavati se temperaturnih i vremenskih uvjeta, pravila za pripremu reagensa i biomaterijala. Prednost Coombsovog testa je njegova visoka osjetljivost. Kod hemolitičke anemije, rezultati ovog testa ostaju pozitivni, čak i ako se hemoglobin, bilirubin i retikulociti vrate na normalu.

Priprema za analizu i prikupljanje materijala

Materijal za izvođenje Coombsovog testa je venska krv. Ne postoje posebni zahtjevi za vrijeme postupka vađenja krvi i za pripremu pacijenta. Kao i kod svake studije, preporučuje se napraviti pauzu nakon jela od najmanje 4 sata, au zadnjih 30 minuta prestati pušiti, tjelesna aktivnost izbjegavajte emocionalni stres. Također je vrijedno unaprijed razgovarati sa svojim liječnikom o potrebi prestanka uzimanja lijekova - neki lijekovi mogu iskriviti rezultate Coombsovog testa. Krv se uzima štrcaljkom iz kubitalne vene, rjeđe iz vene na nadlanici. U roku od nekoliko sati materijal se isporučuje u laboratorij.

Kod izvođenja izravnog Coombsovog testa serumu krvi bolesnika dodaje se antiglobulinski serum. Nakon nekog vremena, smjesa se ispituje na prisutnost aglutinata - oni nastaju ako postoje antitijela na crvenim krvnim stanicama. S pozitivnim rezultatom određuje se aglutinacijski titar. Indirektni Coombsov test sastoji se od više koraka. Najprije se antitijela prisutna u serumu fiksiraju na ubrizgane eritrocite tijekom inkubacije. Zatim se uzorku dodaje antiglobulinski serum, nakon nekog vremena utvrđuje se prisutnost i titar aglutinata. Period analize je 1 dan.

Normalni rezultati

Normalno, rezultat izravnog Coombsovog testa je negativan (-). To znači da u krvi nema antitijela povezanih s crvenim krvnim zrncima i ona ne mogu biti uzrok hemolize. Normalan rezultat neizravni Coombsov test također je negativan (-), odnosno nema antitijela na Rh faktor u krvnoj plazmi. Pri pripremi za transfuziju krvi za primatelja to znači kompatibilnost s krvlju davatelja, pri praćenju trudnoće - odsutnost Rh senzibilizacije majke, niski rizik razvoj imunološkog sukoba. Fiziološki čimbenici kao što su prehrambene navike ili tjelesna aktivnost, ne može utjecati na rezultat testa. Stoga, ako je rezultat pozitivan, potrebna je konzultacija liječnika.

Dijagnostička vrijednost analize

Pozitivan rezultat Coombsovog testa izražava se kvalitativno, od (+) do (++++), ili kvantitativno, titrima od 1:16 do 1:256. Određivanje koncentracije protutijela na eritrocitima iu krvnom serumu provodi se u obje vrste uzoraka. S pozitivnim rezultatom izravnog Coombsovog testa otkrivaju se antitijela na vanjskoj membrani crvenih krvnih stanica, koja dovode do uništenja tih krvnih stanica. Uzrok može biti transfuzija krvi bez prethodne tipizacije - posttransfuzijska hemolitička reakcija, kao i eritroblastoza novorođenčeta, hemolitička reakcija zbog primjene lijekova, primarna ili sekundarna autoimuna hemolitička anemija. Sekundarna destrukcija eritrocita može biti uzrokovana sistemskim eritemskim lupusom, Evansovim sindromom, Waldenströmovom makroglobulinemijom, paroksizmalnom hladnom hemoglobinurijom, kroničnom limfocitnom leukemijom, limfomom, infektivnom mononukleozom, sifilisom, mikoplazmatskom pneumonijom.

Pozitivan rezultat neizravnog Coombsovog testa ukazuje na prisutnost antitijela na Rh faktor u plazmi. U praksi to znači da je došlo do Rh senzibilizacije, postoji mogućnost razvoja Rh sukoba nakon infuzije krvi donora tijekom trudnoće. Kako bi se spriječile komplikacije u trudnoći, žene s pozitivnim rezultatom Coombsovog testa stavljaju se na posebnu evidenciju.

Liječenje odstupanja od norme

Coombsov test odnosi se na izoserološke studije. Njegovi rezultati omogućuju prepoznavanje hemolitičke reakcije, kao i određivanje kompatibilnosti krvi davatelja i primatelja, majke i fetusa, kako bi se spriječio razvoj Rhesus sukoba. Ako je rezultat testa pozitivan, potrebno je potražiti savjet od liječnika - opstetričar-ginekologa, hematologa, kirurga.

Izravni Coombsov test. Uz pomoć ovog testa dokazuje se prisutnost blokirajućih antitijela fiksiranih djetetovim eritrocitima. Pozitivan direktni test ukazuje na senzibilizaciju i jak je pokazatelj hemolitičke bolesti novorođenčeta i prije pojave ostalih. klinički znakovi. Iznimno, i to samo u vrlo teški slučajevi izravni Coombsov test može biti negativan zbog već započete, gotovo potpune hemolize senzibiliziranih eritrocita.

Izravni Coombsov test provodi se na sljedeći način: u epruvetu se stavi 5 kapi krvi uzete iz pete djeteta i doda 5 ml fiziološke otopine. Dobro promiješajte i centrifugirajte 10 minuta. Iz sedimenta eritrocita izdvaja se bistra tekućina. Zatim ponovno dodajte 5 ml fiziološke otopine, promiješajte i centrifugirajte. Nakon trostrukog miješanja s fiziološkom otopinom, eritrociti se dobro isperu. Nakon posljednjeg odvajanja supernatanta, sediment eritrocita u količini od 0,1 ml pomiješa se s 0,9 ml fiziološke otopine. Nanesite 2-3 kapi ove mješavine na predmetno staklo i dodajte jednu kap Coombsovog seruma. Prisutnost aglutinacije ukazuje da je reakcija pozitivna (pozitivan direktni Coombsov test). Ispitivanje treba provesti na sobnoj temperaturi iznad 16°C kako bi se izbjeglo djelovanje hladnih aglutinina.

Indirektni Coombsov test služi kao dokaz prisutnosti slobodnih antitijela u serumu majke i izvodi se sa serumom majke.

Hemolitička bolest u novorođenčadi s Rh inkompatibilnošću obično se manifestira nakon druge trudnoće. Prvo dijete rađa se zdravo, drugo sa znakovima blage anemije, a tek nakon treće trudnoće djeca s jasni znakovi hemolitička bolest. Samo kod prethodno senzibiliziranih žena tijekom prve trudnoće može se roditi dijete sa simptomima hemolitičke bolesti. U nekim slučajevima imunizacija uzrokuje pobačaje i mrtvorođenčad. Za nastanak i težinu bolesti važno je stanje posteljice i trajanje izloženosti fetusa majčinim aglutininima. S pojavom aglutinina 10-14 tjedana prije rođenja dijete obično ima subkliničke oblike. Rana pojava aglutinina, 15-26 tjedana prije poroda, uzrokuje teške oblike bolesti. U svim oblicima bolesti glavni proces je hemoliza. Posljedica reakcije antigen-antitijelo je hemoliza, oštećenje jetrenih i moždanih kapilara. Ovisno o tome koja lezija prevladava postoje i razne forme bolesti. Opasni su i neki anafilaktički fenomeni. Oni dovode do stvaranja tvari sličnih histaminu koje uzrokuju teška oštećenja stanica jetre, a posebno ganglijskih stanica bazalnih jezgri, amonovog roga, produžene moždine, pa čak i kore velikog mozga. S oštećenjem jetrenih stanica ekstrahepatalnoj žutici pridružuje se hepatalna žutica. Djeca umiru s teškim simptomima nuklearne žutice. Ako prežive, simptomi lezija ostaju. živčani sustav(poremećaji ekstrapiramidalnog sustava s koreoatetičkim pokretima, svojevrsnim plesnim hodom, forsiranim pokretima glave, ponekad poremećajem koordinacije voljnih pokreta s čestim padovima, povećan tonus mišića, mentalna retardacija, tj. sa znakovima tzv. encephalopathia posticteria infantum).

Coombs, Morant, Reis predložili su 1945. godine antiglobulinski test namijenjen otkrivanju nepotpunih antieritrocitnih protutijela, a kasnije je nazvan Coombsov test. Suština ove metode leži u činjenici da antiglobulinski serum koji sadrži antitijela na humane imunoglobuline, kada reagira s eritrocitima senzibiliziranim nepotpunim antitijelima, dovodi do njihove aglutinacije.

Ovisno o tome jesu li protutijela fiksirana na površini crvenih krvnih stanica ili su slobodna u krvnoj plazmi, koristi se izravni ili neizravni Coombsov test.

Izravni Coombsov test provodi se u slučajevima kada postoji razlog za vjerovanje da su crvene krvne stanice koje se proučavaju već in vivo su senzibilizirani odgovarajućim antitijelima, tj. u tijelu se dogodila prva faza reakcije - fiksacija protutijela na površini eritrocita, a naknadni dodatak antiglobulinskog seruma uzrokuje aglutinaciju senzibiliziranih stanica.

Pomoću neizravnog Coombsovog testa otkrivaju se nepotpuna antitijela prisutna u testnom serumu. U ovom slučaju reakcija se odvija u dvije faze. Prva faza je inkubacija ispitivanih eritrocita s ispitivanim serumom, tijekom koje se antitijela sadržana u uzorku ispitivanog seruma fiksiraju na površini eritrocita. Druga faza je dodavanje antiglobulinskog seruma.

Do sada je Coombsov test naširoko korišten u laboratorijskoj praksi za dijagnozu imunopatoloških stanja, posebno kod autoimunih hemolitičkih anemija, karakteriziranih uništavanjem eritrocita zbog vezanja stanične membrane na antitijela i (ili) komponente sustava komplementa. Uz njegovu pomoć detektira se prisutnost Ig G (obično Ig G1 i Ig G3) na membrani eritrocita, koji može aktivirati komplement, a ponekad i komplement (C3d). Međutim, u akutnom razdoblju bolesti, zbog razaranja eritrocita, na kojem veliki broj antitijela, s hemolitičkom krizom, kao i s nedovoljnom količinom antitijela u kroničnom tijeku bolesti, može se primijetiti negativan direktni Coombsov test.

Mora se naglasiti da neizravni Coombsov test ostaje najbolja metoda individualni odabir medija za transfuziju, jer vam omogućuje da najtočnije odredite individualnu kompatibilnost davatelja i primatelja za antigene eritrocita.

U pregledu svih primatelja organa i tkiva u predtransplantacijskom razdoblju te primatelja krvotvornih matičnih stanica i nakon transplantacije preporučuje se dodatni izravni antiglobulinski test na prisutnost autoantitijela.

Osim u imunohematologiji i transfuziologiji, antiglobulinski testovi imaju široku primjenu u dijagnostici niza patoloških stanja: u hematološkim bolestima, uključujući limfoproliferativne, u sistemske bolesti vezivno tkivo, Sjögrenova bolest, kronični aktivni hepatitis itd.

Coombsovi testovi aktivno se koriste u medicinskoj genetici i forenzičkoj medicini za određivanje površinskih antigena eritrocita.

Coombsov test prilično je dugotrajna istraživačka metoda koja zahtijeva posebnu pažnju u provedbi. Kada se koristi, postoje neke poteškoće povezane, osobito s tumačenjem slabo pozitivnih reakcija. Poznato je da lažne slabe pozitivne ili negativne reakcije pri provođenju Coombsovih testova mogu biti posljedica nedovoljno učinkovitog pranja eritrocita, neutralizacije antiglobulinskog reagensa tragovima seruma i kontakta s neodmašćenom površinom na koju se može fiksirati antiglobulin, gubeći svoju aktivnost. Drugi nedostatak Coombsovog testa je nestabilnost antiglobulinskog reagensa, čija priprema i skladištenje imaju određene značajke, što također otežava kvantifikaciju reakcije hemaglutinacije s antiglobulinskim serumom.

Osim toga, studije koje su proveli A. Holburn, D. Voak i sur. , pokazalo je da pretjerano mućkanje tijekom resuspendiranja suspenzije crvenih krvnih zrnaca može biti uzrok lažno negativnih rezultata. Pogrešni rezultati pri izvođenju antiglobulinskih testova mogu biti i posljedica prisutnosti primjesa antikomplementarnih protutijela u antiglobulinskom reagensu, posebice na komponente komplementa C3d, C3c, C4c i C4d, koje se tijekom inkubacije adsorbiraju na površini ispitivanih eritrocita i stvaraju privid pozitivnog rezultata.

Ovi se nedostaci mogu lako otkloniti temeljitim pranjem ispitnih uzoraka i kontrolom uvjeta reakcije.

U posljednjem desetljeću, izotonična fiziološka otopina niske ionske jakosti (LISS) korištena je za smanjenje vremena i osjetljivosti neizravnog Coombsovog testa.

Neosporna prednost antiglobulinskih testova, prema nizu autora, je njihova visoka osjetljivost, koja znatno premašuje rezoluciju. alternativne metode testovi koji se koriste za otkrivanje neaglutinirajućih protutijela.

Usporedili smo rezoluciju metoda za ispitivanje krvnih seruma na prisutnost nepotpunih protutijela pomoću poliglucina, želatine i antiglobulinskog seruma. U tijeku istraživanja praćeni su titri nekompletnih anti-D protutijela u 140 uzoraka krvnog seruma izoimunih darivatelja pomoću želatinskih, poliglucinskih i indirektnih antiglobulinskih testova. Izjava o ovim metodama provedena je u skladu s općeprihvaćenim metodama.

Utvrđeno je da su metode za otkrivanje senzibilizacije eritrocita anti-D protutijelima po razlučivosti raspoređene na sljedeći način: najosjetljiviji je neizravni Coombsov test, zatim želatinski test, a najmanje informativan je poliglucinski test. Rezultati dobiveni u ovoj seriji eksperimenata u potpunosti odgovaraju literaturnim podacima, što nam omogućuje da zaključimo da je osjetljivost Coombsovih testova dovoljno visoka, što omogućuje s visokim stupnjem sigurnosti identificirati prisutnost antieritrocitnih protutijela u tijelu koja ne uzrokuju aglutinaciju crvenih krvnih stanica.

Međutim, u praksi Coombsovih testova postoje slučajevi kada se nekompletna protutijela ne detektiraju, iako klinička slika bolesti ili prethodna imunizacija upućuju na njihovu moguću prisutnost. U takvim slučajevima može se pretpostaviti da količina protutijela nije dovoljna da bi se taložila antiglobulinskim serumskim protutijelima.

Ovaj zaključak potvrdili smo i vlastitim pokusom u kojem je metodom analitičke mikroelektroforeze stanica utvrđena prisutnost anti-D protutijela na ispitivanim eritrocitima koja nisu bila detektirana indirektnim Coombsovim testom. U ovoj seriji eksperimenata antiglobulinski serum dodan je eritrocitima, prethodno inkubiranim sa serumima dobivenim iz krvi imuniziranih darivatelja, tijekom perioda nastanka antitijela u hodu, tj. u razdoblju kada poznatim metodama, uključujući Coombsov test, u njima nisu otkrivena protutijela.

U provedenim studijama dokaz o prisutnosti nepotpunih protutijela na površini eritrocita statistički je značajna promjena vrijednosti elektroforetske pokretljivosti senzibiliziranih crvenih krvnih stanica nakon dodatka antiglobulinskog seruma. Treba napomenuti da su naknadno u krvnom serumu svih imuniziranih darivatelja u neizravnom Coombsovom testu otkrivena anti-D protutijela.

Gillerand i sur. također je pokazalo da su antiglobulinski testovi karakterizirani određenim pragom osjetljivosti: pozitivan rezultat se bilježi samo kada je najmanje 500 molekula Ig G fiksirano na površini jednog eritrocita.

Osim toga, u literaturi postoje dokazi da mogući negativni Coombsov rezultat može biti posljedica niskog afiniteta protutijela koja senzibiliziraju crvene krvne stanice, zbog čega se one lako eluiraju s površine crvenih krvnih stanica tijekom pranja.

S obzirom na navedeno, može se zaključiti da u nekim slučajevima negativan rezultat Coombsovog testa još nije dokaz nepostojanja antitijela fiksiranih na površini eritrocita.

Poznato je da su Coombsove reakcije vrlo specifične i omogućuju otkrivanje većine vrsta nepotpunih protutijela. Međutim, kako pokazuju neki eksperimentalni podaci, antiglobulinski testovi mogu biti pozitivni i u neimunološkim stanjima. E. Muirhead i sur. drugi dan nakon primjene fenilhidrazina, uočeno je da psi imaju pozitivan Coombsov test. Takva brza pojava pozitivne reakcije svjedoči protiv njezine imunološke prirode, već je povezana s nespecifičnom adsorpcijom proteina na površini eritrocita.

M. Williams i sur. otkrili su da klavulanska kiselina također može izazvati pozitivnu reakciju, koja je, prema autorima, povezana s nespecifičnom adsorpcijom proteina plazme na površini eritrocita. Sličan učinak zabilježen je i kod liječenja cefalosporinskim antibioticima.

Autori gore navedenih studija naglašavaju neimunološki karakter dobivenih pozitivnih rezultata Coombsovih testova i inzistiraju na tome da su ove tvari sposobne izazvati modifikaciju membrana crvenih krvnih stanica, zbog čega eritrociti mogu adsorbirati proteine ​​(osobito albumin), koji su normalno prisutni u krvnoj plazmi i nemaju svojstva antitijela. Osim toga, moguće je da upravo ksenobiotik, adsorbiran na površini stanice, služi kao veza između stanične membrane i proteina plazme.

Za ispravnu interpretaciju rezultata postavljanja antiglobulinskih testova treba uzeti u obzir i kvantitativni odnos mladih i zrelih eritrocita u perifernoj krvi. Utvrđeno je da se retikulociti izolirani iz tijela u razdoblju pojačane regeneracije eritrona mogu aglutinirati antiglobulinskim serumom.

Pozitivan rezultat izravnog antiglobulinskog testa Također se koristi kod različitih patoloških stanja praćenih poremećajima imunološki sustav, upalni procesišto dovodi do nespecifične adsorpcije protutijela različite specifičnosti na membranama eritrocita. To sugerira da molekule Ig G ne stupaju u interakciju s specifični antigeni eritrocita, ali samo fiksiran na površini proučavanih stanica.

Treba imati na umu da kod postavljanja Coombsovog testa u slučajevima bolesti karakteriziranih razvojem disproteinemije ili pojavom paraproteina, pozitivan rezultat je posljedica prisutnosti na površini eritrocita proteina koji nemaju svojstva protutijela, što također ukazuje na nedovoljnu specifičnost antiglobulinskih testova s ​​obzirom na prirodu proteina otkrivenog uz njihovu pomoć.

Dakle, kao što pokazuju brojne studije, pozitivni rezultati izravnih i neizravnih antiglobulinskih testova nisu apsolutni dokaz prisutnosti protutijela, jer se pozitivne reakcije mogu uočiti iu različitim patološkim stanjima koja nisu povezana s izosenzibilizacijom ili autosenzibilizacijom tijela. Stoga je samo usporedba rezultata nekoliko imunoseroloških metoda sa klinička slika bolest vam omogućuje da u potpunosti prosudite razvoj patološkog procesa.

Pozitivan neizravni antiglobulinski test s negativnim izravnim testom obično ukazuje na prisutnost slobodnih aloantitijela u ispitivanom serumu, povezanih s prethodnim transfuzijama krvi ili trudnoćama.

Coombsov test je često pozitivan tijekom egzacerbacije paroksizmalne noćne hemoglobinurije; pozitivan Coombsov test s anti-C3 i anti-C3dg je marker bolesti hladnog aglutinina.

U slučajevima kada postoji visok rizik od razvoja hemolitičke bolesti novorođenčeta, veliki značaj za dijagnozu (najčešće u trudnoći) i po potrebi dinamičko praćenje pojave i promjene titra protutijela, imati rezultate izravnih i neizravnih antiglobulinskih testova. Najčešće je hemolitička bolest novorođenčadi povezana s nekompatibilnošću majke i fetusa za antigen D, rjeđe za antigene AB0 sustava, a još rjeđe za druge antigene (C, c, K itd.). Dobivena antitijela la, budući da su u pravilu nepotpuna antitijela klase Ig G, jasno se otkrivaju u neizravnom antiglobulinskom testu. Kod ove bolesti od velike je važnosti pravilno utvrđen titar i specifičnost otkrivenih protutijela, budući da postoji određena korelacija između razine antieritrocitnih protutijela u krvi trudnice i moguće prognoze težine hemolitičke bolesti.

Također je potreban neizravni Coombsov test klinička praksa kako bi se osigurala sigurna transfuzijska terapija. Njegova provedba obvezna je komponenta imunohematoloških studija davatelja i različitih kategorija primatelja, kao i rutinskih pregleda svih pacijenata medicinskih ustanova kojima je možda potrebna transfuzija krvi i njezinih komponenti.

Indirektni antiglobulinski test koristi se u sljedećim slučajevima:

Za točnije određivanje Rh pripadnosti (antigen D) s nejasnim rezultatima određivanja Rh faktora drugim metodama (poliglukin, želatina itd.);

Za otkrivanje slabih antigena eritrocita (sustavi Kell, Duffy, Kidd, Lewis itd.) i antitijela na te antigene;

Za detekciju i identifikaciju aloimunih antieritrocitnih protutijela, uključujući protutijela koja uzrokuju hemolitičke posttransfuzijske reakcije;

Utvrditi prisutnost imunoloških protutijela AB0 sustava u transfuzijskim hemolitičkim komplikacijama;

Kao test kompatibilnosti za individualni odabir transfuzirane krvi i njezinih komponenti.

Stoga je Coombsov test važna dijagnostička pretraga koja se koristi u raznim područjima medicine (hematologija, opstetricija, reumatologija, transfuziologija, klinička i laboratorijska dijagnostika itd.). Poznavanje karakteristika Coombsovog testa pomoći će u povećanju pouzdanosti rezultata i pridonijet će ispravnoj interpretaciji laboratorijskih podataka.

Književnost

1. Antitijela. Metode / ur. D. Cathy. — M.: Mir, 1991.

2. Bayramalibeyli I.E., Rahimov A.A., Gadžijev A.B.. // Transfuzijska terapija anemije: udžbenik. vodič za liječnike. - M.: Prakt. medicina, 2005. - S. 105-106.

3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// Transfuziologija. - 2006. - br. 2. - S. 39-62.

4. Donskov S.I.// Krvne grupe Rhesus sustava: teorija i praksa. - M.: VINITI RAN, 2005. - S. 180-186, 195.

5.Imunoserologija (normativni dokumenti) / komp. A.G. Bashlay, S.I. Donskov. — M.: VINITI RAN, 1998.

6.Istraživanje krvnog sustava u kliničkoj praksi / ur. G.I. Kozintsa, V.A. Makarov. — M.: Triada-X, 1997.

7. Levin V.I. O mehanizmu eritrodijereze i eritropoeze u razdoblju akutne posthemoragijske anemije: dr. sc. dis. …kand. med. znanosti. - Minsk, 1968.

8. Rahimov A.A., Bairamalibeyli I.E.. // Osnove dijagnostike, prevencije i liječenja anemije. - M .: GOU VUNMTs Ministarstva zdravstva Ruske Federacije, 2002. - S. 204-209.

9. Chumakova E.D.. // Stvarni problemi hematologija i transfuziologija: materijali VI kongresa hematologa i transfuziologa Republike Bjelorusije, Minsk, 24.-25. svibnja 2007. / ur. A.I. Svirnovsky, M.P. Potapnjev. - Minsk: Republički znanstveni i praktični centar za hematologiju i transfuziologiju, 2007. - S. 50.

10. Coombs R., Mourant A., Race R. // Lancet. - 1945. - God. 2. - 15. str.

11. Freedman J. // J. Clin. Pathol. - 1979. - Vol. 32. - Str. 1014-1018.

12. Holburn A.M. kontrola kvalitete. Metode u hematologiji / ur. I. Cavill. - Edinburg: Churchill Livingstone, 1982. - Sv. 4. - Str. 34-50.

13. Khan S.// CMAJ. - 2006. - Vol. 175, br. 8. - 919. str.

14. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Vol. 63 (dodatak 7). - Str. 719-721.

15. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Vol. 63 (dodatak 7). - Str. 716-718.

16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F.// Novi engl. J. Med. —1976. — sv. 277. - Str. 123-125.

17. Muirhead E.E., GrovesM., Brian S. // J. Lab. Clin. Med. —1954. — sv. 44. - Str. 902-903.

18. Rosse W.F.//Hosp. Prac. - 1995. - N 105.

19. Voak D., Downie D., Mooreb. et al. //Biotestovi Bull. - 1986. - Vol. 1. - Str. 41-52.

20. Voak D., Haigh T., Downie D. et al. Strojevi za pranje stanica za antiglobulinske testove. Ponovljeno testiranje - nova metoda koja pokazuje neučinkovitost jednog naširoko korištenog stroja - Sorvall CW1-AF2: izvješće Tehničkom ogranku DHSS-a, veljača 1991.

21. Williams M.E., Thomas D., Harman C.P. et al. //Antimikrobna sredstva i kemoterapija. -1985. - Str. 125-127.

22. Zarandona J.M., Yazer M.H. // CMAJ. - 2006. - Vol. 174, br. 3. - Str. 305-307.

Medicinske vijesti. - 2008. - br. 3. - S. 33-36.

Pažnja! Članak je namijenjen medicinskim stručnjacima. Ponovno ispisivanje ovog članka ili njegovih fragmenata na internetu bez hiperveze na izvorni izvor smatra se kršenjem autorskih prava.

Coombsov test- analiza za otkrivanje protutijela pričvršćenih na površinu ili otopljenih u plazmi. Uz njegovu pomoć otkrivaju se imunizacija i antitijela na crvene krvne stanice. Drugi naziv je antiglobulinski test. Događa se izravno i neizravno.

Na direktni antiglobulinski test otkriva antitijela fiksirana na površini eritrocita. Provodi se kod sumnje na, s drugim autoimunim bolestima, nakon uzimanja lijekova (metildopa, penicilin, kinin) i.

Eritrociti su in vivo senzibilizirani – protutijela su već čvrsto vezana za njih, a dodavanjem antiglobulinskog seruma (anti-IgG) dolazi do slijepljenja senzibiliziranih stanica, što je vidljivo golim okom.

Indirektni Coombsov test detektira antieritrocitna protutijela u krvnoj plazmi, provodi se prije transfuzije krvi i tijekom.

Antieritrocitna antitijela - vrsta autoantitijela, tj. antitijela protiv vlastitih tkiva. Autoantitijela se javljaju kada je imunološki sustav abnormalno reaktivan na određene lijekove, kao što su visoke doze penicilina.

Eritrociti na svojoj površini sadrže različite kemijske strukture (glikolipide, saharide, glikoproteine ​​i proteine), koji se u medicini nazivaju antigeni. Osoba nasljeđuje od roditelja određenu mapu antigena na svakom crvenom krvnom zrncu.

Antigeni se spajaju u skupine, a uz to se krv dijeli u nekoliko skupina - prema sustavu AB0, Rh, Kell, Lewis, Kidd, Duffy. Najpoznatiji i najznačajniji u radu liječnika su AB0 i Rh faktor (Rh).

AB0 sustav

Rh-pripadnost osobe određena je prisutnošću ovih antigena. Posebno važan antigen eritrocita je antigen D. Ako je prisutan, onda govore o Rh-pozitivna krv RhD, a ako nije - o Rh negativan Rhd.

Ako se odgovarajuće antitijelo pridruži antigenima eritrocita, tada dolazi do uništenja eritrocita – bit će hemoliza.

Indikacije

Glavna indikacija za direktnoantiglobulinski test- Sumnja na hemolitičku anemiju. Najčešće se provodi s primarnom autoimunom hemolitičkom anemijom, hemolizom s reumatskim, tumorskim, zarazne bolesti hemoliza izazvana lijekovima.

Ako se anemija pojavi nekoliko dana ili mjeseci nakon transfuzije krvi ili kod dugotrajne žutice u novorođenčeta, također se radi izravni Coombsov test.

Neizravnonapravljen antiglobulinski test prije transfuzije krvi i tijekom trudnoće Rh-negativne žene.

Autoimuna hemolitička anemija

Autoimuna hemolitička anemija (primarna) je klasična autoimuna bolest nepoznatog uzroka. Interakcija unutar imunološkog sustava je poremećena, što dovodi do percepcije vlastitih eritrocita kao stranih. U limfnim čvorovima se sintetiziraju protutijela klase IgG (reagiraju na t 37 °C) i/ili IgM (na t 40 °C), koja, kada se pričvrste na površinu eritrocita, pokreću niz enzima (sustav komplementa) i "buše" stijenku eritrocita, što dovodi do njegovog uništenja - hemolize.

Prvi simptomi nastaju zbog razaranja crvenih krvnih stanica i smanjenja hemoglobina. Među njima:

• umor, opća slabost, razdražljivost
• dispneja
• bolovi u trbuhu i prsima, mučnina
• tamna boja urina
• bol u leđima
• ikterično obojenje kože i sluznica
• smanjenje broja eritrocita i

pozitivan izravni rezultat Coombsov test 100% potvrđuje dijagnozu autoimune hemolitičke anemije, dokazujući njezino autoimuno podrijetlo. Istodobno, negativan rezultat ne omogućuje uklanjanje dijagnoze.

Sekundarna hemolitička anemija

Sekundarna autoimuna hemolitička anemija i pozitivan Coombsov test mogu biti uz sljedeće bolesti:

• Evansov sindrom
• infekcija pneumonijom

Pozitivan antiglobulinski test kod ovih bolesti jedan je od simptoma, a ne dijagnostički kriterij.

Hemolitička bolest novorođenčadi

Uzrok hemolitička bolest novorođenčadi nekompatibilnost krvne grupe u majke i fetusa, u većini slučajeva prema Rh sustavu, u pojedinačnim slučajevima - prema sustavu AB0, kazuistički - prema drugim antigenima.

Rh-konflikt se razvija ako je kod Rh-negativne žene fetus naslijedio Rh-pozitivnu krv od svog oca.

Bolest se kod novorođenčadi razvija samo ako je majka već razvila antitijela na odgovarajuće antigene, što se događa nakon prethodnih trudnoća, pobačaja, transfuzije nekompatibilne krvi. Najviše zajednički uzrok pokretanje sinteze antitijela na antigene membrane eritrocita – porođaj (feto-maternalno krvarenje). Prvi porodi uglavnom prolaze bez komplikacija, ali kasniji porodi su puni hemolitičke bolesti novorođenčeta u prvim danima nakon rođenja.

Simptomi hemolitičke bolesti novorođenčadi:

• žutost kože
• , i sluzav
• povećanje jetre i slezene
• respiratorni poremećaji
• oticanje cijelog tijela
• ekscitacija i postupna depresija središnjeg živčanog sustava

Anemija nakon transfuzije krvi

Indirektni Coombsov test provodi se prije transfuzije krvi za procjenu kompatibilnosti, a izravni Coombsov test - nakon njega ako se sumnja na posttransfuzijsku hemolizu, tj. ako imate simptome kao što su vrućica, suzenje (pročitajte dolje). Svrha testa je otkrivanje antitijela na transfuzirane eritrocite koja su se vezala na eritrocite primatelja i uzrokuju posttransfuzijsku hemolizu, kao i prijevremeno uklanjanje donorskih eritrocita iz cirkulacije primatelja (primatelja).

Simptomi:

• povećanje tjelesne temperature
• osip na koži
• bol u leđima
• Crvena
• mučnina
• vrtoglavica

Dešifriranje

Vrijedno je podsjetiti da su temeljna pravila za dekodiranje izravnih i neizravnih antiglobulinskih testova ista. Jedina razlika je mjesto antitijela - u krvi ili već na eritrocitu.

• Ako direktni Coombsov test je negativan- znači da antitijela ne “sjedaju” na eritrocite i uzrok simptoma treba dalje tražiti i liječiti neizravni uzorak Coombs
• ako se pozitivan nalaz Coombs testa utvrdi nakon transfuzije krvi, infekcija, lijekova - pozitivnost traje do 3 mjeseca (vrijeme života eritrocita 120 dana - 3 mjeseca)
• pozitivan rezultat antiglobulinskog testa autoimuna bolest traje mjesecima pa i godinama

Norma

• direktni Coombsov test – negativan
• neizravni Coombsov test – negativan

Kvalitativno se pozitivan rezultat mjeri brojem pluseva od jedan do četiri (+, ++, +++, ++++), a kvantitativno u digitalnom obliku - 1:16, 1:256 itd.

Da. Činjenicu da ste primili transfuziju krvi morate znati svom liječniku jer to sada utječe na ispravno tumačenje rezultata testa. Prilikom primanja tuđe (iako višestruko testirane krvi) uvijek postoji mogućnost da će vaše tijelo razviti antitijela na transfundiranu krv. Upravo će ta antitijela imati negativan utjecaj na zdravlje. Kod naknadnih transfuzija krvi liječnik bi trebao znati da ste već primili transfuziju, što znači da je bilo vremena za sintezu antitijela. Za trudnice su ove informacije još važnije.

3. Ako postoji neusklađenost Rh faktora između majke i djeteta, hoće li sva djeca biti bolesna?

Ovisi o tome je li dijete Rh pozitivno ili negativno (RhD). Nosioci krvnih grupa I, II, III i IV mogu biti Rh pozitivni i negativni. U situaciji kada je majka Rh negativna, a dijete Rh pozitivno, antitijela će se stvarati već s prvom trudnoćom, ali tek nakon prvog poroda (ili prekida trudnoće) dolazi do izravnog kontakta između krvi majke i djeteta. Provedba hemolitičkog učinka protutijela bit će samo u drugom i sljedećim rođenjima, što će dovesti do hemolitičke bolesti u novorođenčadi.

Svaka žena s negativnim Rh faktorom treba pažljivo pregledati tijekom trudnoće, a nakon poroda, preventivno liječenje kako bi se spriječila pojava protutijela i daljnjih komplikacija.

4. Je li tijekom trudnoće potrebno znati krvnu grupu supruga prije provođenja Coombsovog testa?

Potrebno je ne samo znati, već i provjeriti krvnu grupu biološkog oca djeteta tijekom trudnoće.

Podaci

• prvi put predložen na Cambridgeu 1945
• prag osjetljivosti - najmanje 300 fiksiranih molekula protutijela na jednom eritrocitu
• broj antitijela koja pokreću hemolizu - pojedinačno za svaku osobu (od 16-30 do 300)
• dinamika ostalih laboratorijskih pokazatelja hemolitičke anemije (hemoglobin, bilirubin, retikulociti) može se normalizirati, a Coombsov test će ostati na istoj razini

Coombsov test zadnji put je modificirao: 16. ožujka 2018 Marija Bodjan

Na ploču ili predmetno staklo nanese se pipetama (različitim!) 1 velika kap O (I), A (II), B (III) seruma. Osjećajući vrijeme, čistim staklenim štapićem ili čistim kutom stakalca, kapljice seruma spajaju se s kapima krvi. Određivanje traje 5 minuta uz protresanje ploče, zatim se u svaku mješavinu kapi doda 1 kap fiziološke otopine i evaluiraju se rezultati. Bolje je ako je serum 2 različite serije. Rezultati krvnih grupa moraju odgovarati u obje serije seruma.

Procjena rezultata izohemaglutinacije:

izohemaglutinacija. Uz pozitivnu reakciju, u smjesi se pojavljuju sitna crvena zrnca slijepljenih crvenih krvnih stanica. Zrna se spajaju u veća zrna, a ova u ljuskice. Serum je gotovo bezbojan;

s negativnom reakcijom, smjesa ostaje ravnomjerno obojena ružičasto 5 minuta i nema zrnaca;

pri radu s 3 seruma skupina O(I), A(II), B(III) moguće su 4 kombinacije reakcija:

1. ako su sva 3 seruma dala negativnu reakciju, odnosno smjesa je ravnomjerno obojena ružičasto - to je O (I) krvna grupa;

   ako je samo serum skupine A (II) dao negativnu reakciju, a serumi O (I) i B (III) dali su pozitivnu reakciju, odnosno pojavila su se zrnca - to je krvna grupa A (II);

   serum B(II) skupine dao je negativnu reakciju, a serumi O(I) i A(II) skupine dali su pozitivnu reakciju - radi se o B(III) krvnoj grupi.

sva 3 seruma dala su pozitivne reakcije - ispitivana krv AB (IV) skupine. U ovom slučaju, studija se provodi sa serumom AB (IV) skupine.

Bilješka! Kapi ispitivane krvi trebaju biti 5-10 puta manje od kapi seruma.

Pogreške izohemaglutinacije.

Nema aglutinacije gdje bi trebala biti i ima aglutinacije gdje ne bi trebala biti. To može biti posljedica niskog titra seruma plus slabe aglutinacije eritrocita.

Prisutnost aglutinacije tamo gdje ne bi trebala biti- ovo je pseudoaglutinacija, kada gomile eritrocita formiraju "kolone novčića". Ljuljanje tanjura ili dodavanje fiziološke otopine ih uništava.

Panaglutinacija, kada serum spaja sve crvene krvne stanice, uključujući vlastitu krvnu grupu. Do 5. minute nestaju znaci aglutinacije.

Postoji i takozvana hladna panaglutinacija, kada se eritrociti lijepe zajedno zbog niske temperature zraka (ispod 15 °C) u prostoriji.

U svim tim slučajevima provodi se ili ponovljena reakcija ili prema standardnim eritrocitima.

Određivanje Rh-pripadnosti krvi

Za određivanje Rh pripadnosti, odnosno za otkrivanje prisutnosti ili odsutnosti antigena Rh sustava u krvi ljudi, koriste se standardni anti-Rhesus serumi (reagensi), koji su različiti po specifičnosti, odnosno sadrže antitijela u odnosu na različite antigene ovog sustava. Za određivanje Rh 0 (D) antigena najčešće se koristi antirezus serum uz dodatak 10% otopine želatine ili se koristi standardni antirezus reagens unaprijed pripremljen s 33% otopinom poliglucina. Da bi se dobili precizniji rezultati studije, kao i za otkrivanje antigena drugih seroloških sustava, koristi se Coombsov test (također je vrlo osjetljiv u određivanju kompatibilnosti transfuzirane krvi). Za studiju se koristi nativna krv ili pripremljena s nekom vrstom konzervansa. U tom slučaju krv treba isprati od konzervansa s deseterostrukim volumenom izotonična otopina natrijev klorid. Kod utvrđivanja Rh-pripadnosti- Rh 0 (D) treba koristiti dva uzorka seruma ili anti-Rhesus reagensa dvije različite serije i istovremeno koristiti standardne eritrocite dobivene iz krvi iz krvi Rh-pozitivnih (Rh +) i Rh-negativnih (Rh -) osoba. Pri određivanju ostalih izoantigena treba koristiti odgovarajuće kontrolne eritrocite koji sadrže ili nemaju antigen protiv kojeg su usmjerena antitijela u standardnom serumu.

Nepotpuni toplinski aglutinini najčešći su tip protutijela koji mogu uzrokovati razvoj autoimune hemolitičke anemije. Ova antitijela pripadaju IgG, rijetko - IgM, IgA.

COOMBSOV TEST

Coombsov test: uvod. Coombsov test je laboratorijska dijagnostička metoda koja se temelji na reakciji hemaglutinacije.

Glavna metoda za dijagnosticiranje autoimune hemolitičke anemije je Coombsov test. Temelji se na sposobnosti antitijela specifičnih za imunoglobuline (osobito IgG) ili komponente komplementa (osobito C3) da aglutiniraju eritrocite obložene IgG ili C3.

Vezanje IgG i C3b za eritrocite uočeno je kod autoimune hemolitičke anemije i imunološke hemolitičke anemije izazvane lijekovima. Izravni Coombsov test. Izravni Coombsov test koristi se za otkrivanje protutijela ili komponenti komplementa fiksiranih na površini crvenih krvnih stanica. Provodi se na sljedeći način:

Za dobivanje protutijela na ljudske imunoglobuline (antiglobulinski serum) ili komplement (antikomplementarni serum), životinja se imunizira ljudskim serumom, imunoglobulinima ili humanim komplementom. Serum dobiven od životinje se pročišćava od antitijela na druge proteine.

Bolesnikovi eritrociti se ispiru fiziološkom otopinom kako bi se potpuno uklonio serum koji neutralizira protutijela na imunoglobuline i komplement te može uzrokovati lažno negativan rezultat.

Ako su protutijela ili komponente komplementa fiksirane na površini eritrocita, dodavanjem antiglobulina ili antikomplementarnog seruma dolazi do aglutinacije eritrocita.

Izravni Coombsov test koristi se u sljedećim slučajevima:

autoimuna hemoliza.

Hemolitička bolest novorođenčadi.

Imunološka hemolitička anemija izazvana lijekovima.

Hemolitičke transfuzijske reakcije. Indirektni Coombsov test. Indirektni Coombsov test otkriva antitijela na eritrocite u serumu. Da bi se to postiglo, pacijentov serum se inkubira s donorskim eritrocitima skupine 0, a zatim se izvodi izravni Coombsov test.

Indirektni Coombsov test koristi se u sljedećim slučajevima:

Određivanje individualne kompatibilnosti krvi davatelja i primatelja.

Detekcija aloantitijela, uključujući antitijela koja uzrokuju hemolitičke transfuzijske reakcije.

Određivanje površinskih eritrocitnih antigena u medicinskoj genetici i sudskoj medicini.

Potvrda jednojajčanih blizanaca u transplantaciji koštane srži.

Da bi se proveo biološki test, krv se transfuzira što je brže moguće (po mogućnosti u mlazu). Nakon transfuzije 25 ml krvi, cijev sustava se steže stezaljkom. Zatim se napravi pauza od 3 minute, tijekom koje se prati stanje primatelja. Za postavljanje biološkog uzorka tri puta se ubrizgava 25 ml krvi. Na kraju testa (nakon transfuzije prvih 75 ml krvi u frakcijskim dozama od 25 ml u razmacima od 3 minute), sustav se podešava na potrebnu brzinu transfuzije. Kod transfuzije pacijenta s više od jedne bočice krvi, potrebno je izvaditi iglu iz vene. U tom slučaju, igla se izvadi iz epruvete bočice u kojoj je istekla krv i umetne u sljedeću bočicu. Cijev sustava (gumena ili plastična) je u ovom trenutku stegnuta stezaljkom. Ako tijekom transfuzije krvi postoji potreba za intravenskom primjenom bilo kojeg drugog lijeka primatelju, to se čini probijanjem gumene cijevi sustava. Proboji plastične cijevi su neprihvatljivi jer ne otpadaju. Nakon svake transfuzije krvi, pacijent se mora pratiti kako bi se identificirao i pravovremeno eliminirao moguće komplikacije, uključujući alergijske reakcije. Tjelesnu temperaturu treba izmjeriti 2 sata nakon završetka transfuzije krvi. Uz povećanje njegovog mjerenja mora se ponoviti u sljedeća 4 sata svaki sat. Jednako je važno praćenje mokrenja i sastava urina, što omogućuje utvrđivanje prisutnosti toksične posttransfuzijske reakcije. Pojava oligurije i anurije nakon transfuzije krvi, prisutnost krvnih stanica i bjelančevina u urinu izravni su pokazatelj razvoja posttransfuzijske hemolize.