Značenja i definicije Coombsovog suđenja. Direktan test saćala

- antiglobulinski test koji ima za cilj otkrivanje u Rh-negativnoj krvi nepotpunih antieritrocitnih antitijela na Rh faktor - specifični protein koji se nalazi na površini eritrocita Rh-pozitivne krvi. Postoje dvije vrste ovog testa: direktan – otkrivanje antitijela na površini crvenih krvnih zrnaca, indirektni – otkrivanje antitijela u krvnom serumu. Direktan test se provodi u dijagnostici i praćenju liječenja bolesti krvi: hemolitičke anemije, hemolitička bolest novorođenčadi i dr. Indirektni test se radi radi procene kompatibilnosti krvi davaoca i primaoca tokom transfuzije, kao i utvrđivanja prisustva i rizika od Rh konflikta prilikom planiranja i vođenja trudnoće. Materijal za Coombsov test je deoksigenirana krv, studija se provodi metodama zasnovanim na reakciji aglutinacije. Obično oba testa daju negativan rezultat. Analiza se radi u roku od jednog dana.

Coombsov test - kliničkim ispitivanjima Rh-negativna krv, usmjerena na otkrivanje antitijela na Rh faktor. Test se koristi za identifikaciju rizika od razvoja rezus konflikta i hemolitičkih reakcija. U svakoj osobi, površina eritrocita sadrži određeni skup antigena ili aglutinogena - jedinjenja različite prirode, čije se prisustvo ili odsustvo koristi za procjenu krvne grupe i Rh faktora. Postoji mnogo vrsta antigena, u medicinskoj praksi, aglutinogeni A i B, koji određuju krvnu grupu, a od najvećeg su praktičnog značaja aglutinogen D, Rh faktor. S pozitivnim Rh faktorom, D antigeni se otkrivaju na vanjskoj membrani eritrocita, s negativnim - ne.

Coombsov test, koji se naziva i antiglobulinski test, ima za cilj otkrivanje nepotpunih antieritrocitnih antitijela na sistem Rh faktora u krvi. Antitijela na Rh faktor su specifični imunoglobulini koji se stvaraju u Rh negativnoj krvi kada u nju uđu eritrociti sa aglutinogenima D. To se može dogoditi kada se krv fetusa i trudnice pomiješa, uz transfuziju krvi bez prethodne tipizacije krvi. Coombsov test postoji u dvije verzije - direktnoj i indirektnoj. Prilikom izvođenja direktnog Coombsovog testa otkrivaju se antitijela pričvršćena na površinu crvenih krvnih zrnaca. Studija se koristi za određivanje uzroka hemolitičke reakcije. Indirektni Coombsov test je usmjeren na otkrivanje anti-eritrocitnih antitijela u krvnoj plazmi. Potrebno je utvrditi kompatibilnost krvi davaoca i primatelja ili majke i fetusa, pomaže u sprječavanju razvoja rezus konflikta i naknadne hemolize crvenih krvnih zrnaca.

Krv za obje varijante Coombsovog testa uzima se iz vene. Analiza se vrši metodom aglutinacije uz korištenje antiglobulinskog seruma. Rezultati istraživanja koriste se u hematologiji u identifikaciji uzroka hemolitičkih reakcija, u hirurgiji i reanimaciji pri transfuzijama krvi, u akušerstvu i ginekologiji u praćenju trudnoće kod žena sa Rh negativnom krvlju.

Indikacije

Direktni Coombsov test, koji otkriva antitijela pričvršćena na površinu crvenih krvnih zrnaca, propisan je za hemolitičke reakcije (razaranje crvenih krvnih stanica) različitog porijekla. Studija je indicirana za primarnu autoimunu hemolitičku anemiju, posttransfuzijsku hemolitičku anemiju, hemolitičku bolest novorođenčeta, hemolizu eritrocita uzrokovanu autoimunim, neoplastičnim ili infektivnim bolestima, kao i uzimanje lijekovi npr. kinidin, metildopa, prokainamid. Indirektni Coombsov test, koji otkriva antitijela u krvnoj plazmi, koristi se za sprječavanje razvoja rezus konflikta. Indiciran je za pacijente koji se pripremaju za transfuziju krvi, kao i za trudnice sa negativnim Rh faktorom, pod uslovom da budući otac djeteta ima pozitivan Rh faktor.

Kako bi se utvrdila Rh kompatibilnost, Coombsov test se ne primjenjuje kod pacijenata s Rh-pozitivnom krvlju. U tim slučajevima već postoje antigeni na površini crvenih krvnih zrnaca, proizvodnja antitijela se ne može pokrenuti transfuzijom krvi ili ulaskom krvi fetusa u krvotok trudnice. Također, studija nije indicirana za trudnice ako oba roditelja imaju negativan Rh faktor, nasljednu recesivnu osobinu. Dijete u takvim parovima uvijek ima Rh negativnu krv, imunološki sukob sa majkom je nemoguć. Kod hemolitičkih patologija, antiglobulinski test se ne koristi za praćenje uspješnosti terapije, jer rezultati ne odražavaju aktivnost procesa uništavanja eritrocita.

Ograničenje Coombsovog testa je složenost istraživačkog postupka - da bi se dobili pouzdani rezultati, potrebno je pridržavati se temperaturnih i vremenskih uslova, pravila za pripremu reagensa i biomaterijala. Prednost Coombsovog testa je njegova visoka osjetljivost. Kod hemolitičke anemije, rezultati ovog testa ostaju pozitivni, čak i ako se hemoglobin, bilirubin i retikulociti vrate u normalu.

Priprema za analizu i prikupljanje materijala

Materijal za izvođenje Coombsovog testa je venska krv. Ne postoje posebni zahtjevi za vrijeme uzimanja uzorka krvi i za pripremu pacijenta. Kao i kod svake studije, preporučuje se da napravite pauzu nakon jela od najmanje 4 sata, a u posljednjih 30 minuta da prestanete pušiti, fizička aktivnost izbjegavajte emocionalni stres. Također je vrijedno unaprijed razgovarati sa svojim liječnikom o potrebi prestanka uzimanja lijekova - neki lijekovi mogu iskriviti rezultate Coombsovog testa. Krv se vadi štrcaljkom iz kubitalne vene, rjeđe iz vene na stražnjoj strani šake. U roku od nekoliko sati materijal se dostavlja u laboratoriju.

Prilikom izvođenja direktnog Coombsovog testa, serumu krvi pacijenta dodaje se antiglobulinski serum. Nakon nekog vremena, smjesa se ispituje na prisustvo aglutinata - oni nastaju ako postoje antitijela na crvenim krvnim zrncima. Uz pozitivan rezultat, određuje se titar aglutinacije. Indirektni Coombsov test se sastoji od više koraka. Prvo, antitela prisutna u serumu se fiksiraju na ubrizganim eritrocitima tokom inkubacije. Zatim se uzorku dodaje antiglobulinski serum, nakon nekog vremena utvrđuje se prisustvo i titar aglutinata. Period analize je 1 dan.

Normalni rezultati

Obično je rezultat direktnog Coombsovog testa negativan (-). To znači da u krvi ne postoje antitijela povezana s crvenim krvnim zrncima i ne mogu biti uzrok hemolize. Normalan rezultat indirektni Coombsov test je također negativan (-), odnosno nema antitijela na Rh faktor u krvnoj plazmi. Prilikom pripreme za transfuziju krvi za primaoca to znači kompatibilnost sa krvlju davaoca, kod praćenja trudnoće - odsustvo Rh senzibilizacije majke, nizak rizik razvoj imunološkog konflikta. Fiziološki faktori kao što su prehrambene navike ili fizička aktivnost, ne može uticati na rezultat testa. Stoga, ako je rezultat pozitivan, potrebna je konsultacija s liječnikom.

Dijagnostička vrijednost analize

Pozitivan rezultat Coombs testa izražava se kvalitativno, od (+) do (++++), ili kvantitativno, u titrima od 1:16 do 1:256. Određivanje koncentracije antitijela na eritrocitima iu krvnom serumu vrši se u oba tipa uzoraka. Uz pozitivan rezultat direktnog Coombsovog testa, na vanjskoj membrani crvenih krvnih stanica otkrivaju se antitijela koja dovode do uništenja ovih krvnih stanica. Uzrok može biti transfuzija krvi bez prethodne tipizacije - posttransfuzijska hemolitička reakcija, kao i eritroblastoza novorođenčeta, hemolitička reakcija zbog upotrebe lijekova, primarna ili sekundarna autoimuna hemolitička anemija. Sekundarna destrukcija eritrocita može biti uzrokovana sistemskim eritematoznim lupusom, Evansovim sindromom, Waldenstromovom makroglobulinemijom, paroksizmalnom hladnom hemoglobinurijom, hroničnom limfocitnom leukemijom, limfomom, infektivnom mononukleozom, sifilisom, pneumoplazom.

Pozitivan rezultat indirektnog Coombs testa ukazuje na prisustvo antitijela na Rh faktor u plazmi. U praksi to znači da je došlo do Rh senzibilizacije, postoji mogućnost razvoja Rh konflikta nakon infuzije krvi donora tokom trudnoće. Kako bi se spriječile komplikacije u trudnoći, žene s pozitivnim rezultatom Coombs testa stavljaju se u posebnu evidenciju.

Liječenje odstupanja od norme

Coombsov test se odnosi na izoserološke studije. Njegovi rezultati omogućavaju identifikaciju hemolitičke reakcije, kao i utvrđivanje kompatibilnosti krvi davaoca i primaoca, majke i fetusa, kako bi se spriječio razvoj rezus konflikta. Ako je rezultat testa pozitivan, tada je potrebno potražiti savjet liječnika - akušera-ginekologa, hematologa, kirurga.

Direktan Coombsov test. Uz pomoć ovog testa dokazuje se prisustvo blokirajućih antitijela fiksiranih eritrocitima djeteta. Pozitivan direktni test ukazuje na senzibilizaciju i jak je pokazatelj hemolitičke bolesti novorođenčeta i prije pojave drugih. kliničkih znakova. Kao izuzetak, i to samo u vrlo teški slučajevi direktan Coombsov test može biti negativan zbog već nastale, gotovo potpune hemolize senzibiliziranih eritrocita.

Direktni Coombsov test se izvodi na sljedeći način: 5 kapi krvi uzete iz pete djeteta stavlja se u epruvetu i dodaje se 5 ml fiziološkog rastvora. Dobro promiješajte i centrifugirajte 10 min. Od sedimenta eritrocita izdvaja se bistra tečnost. Zatim ponovo dodajte 5 ml fiziološke otopine, promiješajte i centrifugirajte. Nakon tri puta mešanja sa fiziološkim rastvorom, eritrociti se dobro isperu. Nakon posljednjeg odvajanja supernatanta, sediment eritrocita u količini od 0,1 ml pomiješa se sa 0,9 ml fiziološkog rastvora. Nanesite 2-3 kapi ove mješavine na stakalce i dodajte jednu kap Coombsovog seruma. Prisustvo aglutinacije ukazuje da je reakcija pozitivna (pozitivan direktni Coombs test). Ispitivanje treba provesti na sobnoj temperaturi iznad 16°C kako bi se izbjeglo djelovanje hladnih aglutinina.

Indirektni Coombsov test služi kao dokaz prisustva slobodnih antitijela u serumu majke i izvodi se sa serumom majke.

Hemolitička bolest novorođenčeta s Rh inkompatibilnošću obično se manifestira nakon druge trudnoće. Prvo dijete se rodi zdravo, drugo sa znacima blage anemije, a tek nakon treće trudnoće rađaju se djeca sa jasni znakovi hemolitička bolest. Samo kod prethodno senzibiliziranih žena tokom prve trudnoće može se roditi dijete sa simptomima hemolitičke bolesti. U nekim slučajevima imunizacija uzrokuje pobačaje i mrtvorođenost. Za nastanak i težinu bolesti važno je stanje posteljice i trajanje izlaganja majčinim aglutininima na fetusu. Sa pojavom aglutinina 10-14 nedelja pre rođenja, dete najčešće ima subkliničke forme. Rana pojava aglutinina, 15-26 sedmica prije porođaja, uzrokuje teške oblike bolesti. U svim oblicima bolesti glavni proces je hemoliza. Posljedica reakcije antigen-antitijelo je hemoliza, oštećenje kapilara jetre i mozga. U zavisnosti od toga koja lezija prevladava, postoje i razne forme bolesti. Neki anafilaktički fenomeni su takođe opasni. Oni dovode do stvaranja supstanci sličnih histaminu koje uzrokuju ozbiljna oštećenja ćelija jetre, a posebno ganglijskih ćelija bazalnih jezgara, amonovog roga, produžene moždine, pa čak i moždane kore. Uz oštećenje ćelija jetre, ekstrahepatalnoj žutici se dodaje hepatalna žutica. Djeca umiru s teškim simptomima nuklearne žutice. Ako prežive, simptomi lezija ostaju. nervni sistem(poremećaji ekstrapiramidnog sistema sa koreoatskim pokretima, vrsta plesnog hoda, usiljeni pokreti glave, ponekad poremećaj koordinacije voljnih pokreta sa čestim padovima, pojačan ton mišića, mentalne retardacije, odnosno sa znacima tzv. encefalopatija posticteria infantum).

Antiglobulinski test dizajniran za otkrivanje nepotpunih anti-eritrocitnih antitijela predložili su Coombs, Morant, Reis 1945. godine, a kasnije je nazvan Coombsov test. Suština ove metode leži u činjenici da antiglobulinski serum koji sadrži antitijela na humane imunoglobuline, u reakciji sa eritrocitima koji su senzibilizirani sa nekompletnim antitijelima, dovodi do njihove aglutinacije.

Ovisno o tome da li su antitijela fiksirana na površini crvenih krvnih stanica ili su slobodna u krvnoj plazmi, koristi se direktni ili indirektni Coombsov test.

Direktan Coombsov test se izvodi u slučajevima kada postoji razlog za vjerovanje da su crvena krvna zrnca koja se proučavaju već in vivo su senzibilizirani odgovarajućim antitelima, tj. Prva faza reakcije - fiksacija antitijela na površini eritrocita - nastupila je u tijelu, a naknadno dodavanje antiglobulinskog seruma uzrokuje aglutinaciju senzibiliziranih stanica.

Koristeći indirektni Coombs test, otkrivaju se nepotpuna antitijela prisutna u test serumu. U ovom slučaju, reakcija se odvija u dvije faze. Prva faza je inkubacija test eritrocita sa test serumom, tokom koje se antitela sadržana u uzorku test seruma fiksiraju na površinu eritrocita. Druga faza je dodavanje antiglobulinskog seruma.

Do sada se Coombsov test široko koristio u laboratorijskoj praksi za dijagnozu imunopatoloških stanja, posebno kod autoimunih hemolitičkih anemija, koje karakteriziraju uništavanje eritrocita zbog vezivanja ćelijske membrane za antitijela i (ili) komponente sistem komplementa. Uz njegovu pomoć otkriva se prisustvo Ig G (obično Ig G1 i Ig G3) na membrani eritrocita, koji može aktivirati komplement, a ponekad i komplement (C3d). Međutim, u akutnom periodu bolesti, zbog uništavanja eritrocita, na kojima veliki broj antitijela, s hemolitičkom krizom, kao i sa nedovoljnom količinom antitijela u kroničnom toku bolesti, može se primijetiti negativan direktni Coombsov test.

Mora se naglasiti da ostaje indirektni Coombsov test najbolja metoda individualni odabir transfuzijskih medija, jer vam omogućava da najpreciznije odredite individualnu kompatibilnost donora i primatelja za antigene eritrocita.

Dodatni direktni antiglobulinski test na prisustvo autoantitela preporučuje se u pregledu svih primaoca organa i tkiva u pretransplantacionom periodu i primaoca hematopoetskih matičnih ćelija i nakon transplantacije.

Pored imunohematologije i transfuziologije, antiglobulinski testovi se široko koriste u dijagnostici niza patoloških stanja: kod hematoloških bolesti, uključujući i limfoproliferativna, u sistemske bolesti vezivno tkivo, Sjogrenova bolest, hronični aktivni hepatitis itd.

Coombsovi testovi se aktivno koriste u medicinskoj genetici i sudskoj medicini za određivanje površinskih antigena eritrocita.

Coombsov test je prilično dugotrajna istraživačka metoda koja zahtijeva posebnu pažnju u svojoj primjeni. Kada se koristi, postoje neke poteškoće povezane, posebno s tumačenjem slabo pozitivnih reakcija. Poznato je da lažne slabe pozitivne ili negativne reakcije pri izvođenju Coombsovih testova mogu biti rezultat nedovoljno efikasnog ispiranja eritrocita, neutralizacije antiglobulinskog reagensa tragovima seruma i kontakta sa neomašćenom površinom na koju se antiglobulin može fiksirati, gubi svoju aktivnost. Još jedan nedostatak Coombsovog testa je nestabilnost antiglobulinskog reagensa, čija priprema i skladištenje imaju određene karakteristike, što takođe otežava kvantifikaciju reakcije hemaglutinacije sa antiglobulinskim serumom.

Osim toga, studije koje su sproveli A. Holburn, D. Voak i dr. , pokazalo je da pretjerano tresenje tokom resuspendiranja suspenzije crvenih krvnih zrnaca može biti uzrok lažno negativnih rezultata. Pogrešni rezultati pri izvođenju antiglobulinskih testova mogu biti i zbog prisustva primesa antikomplementarnih antitela u antiglobulinskom reagensu, posebno na komponente komplementa C3d, C3c, C4c i C4d, koje se adsorbuju na površini test eritrocita tokom inkubacije i stvaraju pojava pozitivnog rezultata.

Ovi nedostaci se mogu lako otkloniti temeljnim pranjem uzoraka za ispitivanje i kontrolom uslova reakcije.

U posljednjoj deceniji, izotonični fiziološki rastvor niske jonske snage (LISS) korišten je za smanjenje vremena i osjetljivosti indirektnog Coombsovog testa.

Neosporna prednost antiglobulinskih testova, prema brojnim autorima, je njihova visoka osjetljivost, koja znatno premašuje rezoluciju alternativne metode testovi koji se koriste za otkrivanje neaglutinirajućih antitijela.

Usporedili smo rezoluciju metoda za proučavanje krvnih seruma na prisustvo nekompletnih antitijela korištenjem poliglucinskog, želatinskog i antiglobulinskog seruma. U toku istraživanja praćeni su titri nekompletnih anti-D antitijela u 140 uzoraka seruma krvi izoimunih davalaca primjenom želatinskih, poliglukinskih i indirektnih antiglobulinskih testova. Prikaz ovih metoda je izvršen u skladu sa opšteprihvaćenim metodama.

Utvrđeno je da su metode za otkrivanje senzibilizacije eritrocita anti-D antitijelima u smislu rezolucije raspoređene na sljedeći način: najosjetljiviji je indirektni Coombsov test, zatim želatin test, a najmanje informativan poliglucinski test. Rezultati dobijeni u ovoj seriji eksperimenata u potpunosti odgovaraju podacima iz literature, što nam omogućava da zaključimo da je osjetljivost Coombsovih testova dovoljno visoka, što omogućava da se sa visokim stupnjem sigurnosti identificira prisustvo antieritrocitnih antitijela. u tijelu koje ne izazivaju aglutinaciju crvenih krvnih zrnaca.

Međutim, u praksi Coombsovih testova postoje slučajevi kada se ne otkriju nekompletna antitijela, iako klinička slika bolesti ili prethodna imunizacija ukazuje na njihovo moguće prisustvo. U takvim slučajevima može se pretpostaviti da količina antitijela nije dovoljna da bi se istaložila antiglobulinskim serumskim antitijelima.

Ovaj zaključak je potvrđen i vlastitim eksperimentom, u kojem je metodom analitičke mikroelektroforeze ćelija utvrđeno prisustvo anti-D antitijela na test eritrocitima, koja nisu otkrivena indirektnim Coombsovim testom. U ovoj seriji eksperimenata je eritrocitima, prethodno inkubiranim sa serumima dobijenim iz krvi imuniziranih donora, dodat antiglobulinski serum u periodu nastanka antitela u pokretu, tj. u periodu kada poznate metode, uključujući Coombsov test, nisu otkrile antitijela u njima.

U sprovedenim studijama, statistički je dokazano prisustvo nekompletnih antitela na površini eritrocita. značajna promjena vrijednosti elektroforetske pokretljivosti senzibiliziranih crvenih krvnih stanica nakon dodavanja antiglobulinskog seruma. Treba napomenuti da su naknadno otkrivena anti-D antitijela u krvnom serumu svih imuniziranih davalaca indirektnim Coombsovim testom.

Gillerand et al. također su pokazali da antiglobulinske testove karakterizira određeni prag osjetljivosti: pozitivan rezultat se bilježi samo kada je najmanje 500 Ig G molekula fiksirano na površini jednog eritrocita.

Osim toga, u literaturi postoje dokazi da mogući negativni Coombsov rezultat može biti posljedica niskog afiniteta antitijela koja senzibiliziraju crvena krvna zrnca, zbog čega se ona lako eluiraju s površine crvenih krvnih stanica tijekom pranja.

S obzirom na navedeno, može se zaključiti da u nekim slučajevima negativan rezultat Coombs testa još nije dokaz odsustva antitijela fiksiranih na površini eritrocita.

Poznato je da su Coombsove reakcije vrlo specifične i omogućavaju otkrivanje većine vrsta nepotpunih antitijela. Međutim, kako pokazuju neki eksperimentalni podaci, antiglobulinski testovi mogu biti pozitivni i u neimunološkim stanjima. E. Muirhead et al. drugog dana nakon primjene fenilhidrazina, psi su imali pozitivan Coombsov test. Ovako brza pojava pozitivne reakcije svedoči protiv njene imunološke prirode, već je povezana sa nespecifičnom adsorpcijom proteina na površini eritrocita.

M. Williams et al. utvrdili da klavulanska kiselina može izazvati i pozitivnu reakciju, koja je, prema autorima, povezana s nespecifičnom adsorpcijom proteina plazme na površini eritrocita. Sličan efekat je uočen i pri liječenju cefalosporinskim antibioticima.

Autori navedenih studija ističu neimunološku prirodu dobijenih pozitivnih rezultata Coombsovih testova i insistiraju na tome da su ove supstance sposobne da izazovu modifikaciju membrane crvenih krvnih zrnaca, usled čega eritrociti mogu da adsorbuju proteine ​​(posebno, albumin), koji su normalno prisutni u krvnoj plazmi i ne posjeduju svojstva antitijela. Osim toga, moguće je da upravo ksenobiotik, adsorbiran na površini stanice, služi kao veza između stanične membrane i proteina plazme.

Za pravilno tumačenje rezultata postavljanja antiglobulinskih testova treba uzeti u obzir i kvantitativni odnos mladih i zrelih eritrocita u perifernoj krvi. Utvrđeno je da se retikulociti izolovani iz organizma tokom perioda pojačane regeneracije eritrona mogu aglutinirati antiglobulinskim serumom.

Pozitivan rezultat direktnog antiglobulinskog testa Koristi se i kod raznih patoloških stanja praćenih poremećajima imunološki sistem, upalnih procesašto dovodi do nespecifične adsorpcije antitijela različite specifičnosti na membrane eritrocita. Ovo sugerira da molekuli Ig G ne stupaju u interakciju s njima specifični antigeni eritrociti, ali samo fiksirani na površini proučavanih stanica.

Treba imati na umu da pri postavljanju Coombsovog testa u slučajevima bolesti koje karakterizira razvoj disproteinemije ili pojava paraproteina, pozitivan rezultat je zbog prisustva na površini eritrocita proteina koji nemaju svojstva antitela, što takođe ukazuje na nedovoljnu specifičnost antiglobulinskih testova u pogledu prirode proteina otkrivenog uz njihovu pomoć.

Dakle, kako pokazuju brojne studije, pozitivni rezultati direktnih i indirektnih antiglobulinskih testova nisu apsolutni dokaz prisustva antitijela, jer se pozitivne reakcije mogu uočiti i kod različitih patoloških stanja koja nisu povezana sa izosenzibilizacijom ili autosenzibilizacijom organizma. Stoga je samo poređenje rezultata nekoliko imunoseroloških metoda sa kliničku sliku bolest vam omogućava da u potpunosti procenite patološki proces u razvoju.

Pozitivan indirektni antiglobulinski test sa negativnim direktnim testom obično ukazuje na prisustvo slobodnih aloantitijela u test serumu, povezanih s prethodnim transfuzijama krvi ili trudnoćama.

Coombsov test je često pozitivan tokom egzacerbacije paroksizmalne noćne hemoglobinurije; pozitivan Coombsov test sa anti-C3 i anti-C3dg je marker bolesti hladnog aglutinina.

U slučajevima kada postoji visok rizik od razvoja hemolitičke bolesti novorođenčeta, veliki značaj za dijagnostiku (najčešće u trudnoći) i po potrebi dinamičko praćenje pojave i promene titra antitela imaju rezultate direktnih i indirektnih antiglobulinskih testova. Najčešće je hemolitička bolest novorođenčeta povezana sa nekompatibilnošću majke i fetusa za antigen D, rjeđe za antigene AB0 sistema, a još rjeđe za druge antigene (C, c, K itd.). Nastala antitijela la, budući da su u pravilu nepotpuna antitijela Ig G klase, jasno se otkrivaju indirektnim antiglobulinskim testom. Kod ove bolesti od velikog je značaja tačno utvrđen titar i specifičnost otkrivenih antitela, jer postoji određena korelacija između nivoa antieritrocitnih antitela u krvi trudnice i moguće prognoze težine hemolitičke bolesti.

Indirektni Coombsov test je također potreban u kliničku praksu kako bi se osigurala sigurna transfuzijska terapija. Njegova implementacija je obavezna komponenta imunohematoloških studija davalaca i različitih kategorija primatelja, kao i rutinskih pregleda svih pacijenata zdravstvenih ustanova kojima je potrebna transfuzija krvi i njenih komponenti.

Indirektni antiglobulinski test koristi se u sljedećim slučajevima:

Za preciznije određivanje Rh pripadnosti (antigen D) sa nejasnim rezultatima određivanja Rh faktora drugim metodama (poliglucin, želatin, itd.);

Za otkrivanje slabih antigena eritrocita (Kell, Duffy, Kidd, Lewis, itd. sistemi) i antitela na ove antigene;

Za detekciju i identifikaciju aloimunih antieritrocitnih antitijela, uključujući antitijela koja uzrokuju hemolitičke posttransfuzijske reakcije;

Utvrditi prisustvo imunih antitela AB0 sistema u transfuzionim hemolitičkim komplikacijama;

Kao test kompatibilnosti za individualnu selekciju transfuzirane krvi i njenih komponenti.

Stoga je Coombsov test važan dijagnostički test koji se koristi u različitim oblastima medicine (hematologija, akušerstvo, reumatologija, transfuziologija, klinička i laboratorijska dijagnostika itd.). Poznavanje karakteristika Coombsovog testa pomoći će povećanju pouzdanosti rezultata i doprinijet će ispravnoj interpretaciji laboratorijskih podataka.

Književnost

1. Antitijela. Metode / ur. D. Cathy. — M.: Mir, 1991.

2. Bayramalibeyli I.E., Rahimov A.A., Gadzhiev A.B.. // Transfuzijska terapija anemije: udžbenik. vodič za doktore. - M.: Prakt. medicina, 2005. - S. 105-106.

3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// Transfuziologija. - 2006. - br. 2. - S. 39-62.

4. Donskov S.I.// Krvne grupe rezus sistema: teorija i praksa. - M.: VINITI RAN, 2005. - S. 180-186, 195.

5.Imunoserologija (normativni dokumenti) / komp. A.G. Bashlay, S.I. Donskov. — M.: VINITI RAN, 1998.

6.Istraživanje krvnog sistema u kliničkoj praksi / ur. G.I. Kozintsa, V.A. Makarov. — M.: Triada-X, 1997.

7. Levin V.I. Mehanizmu eritrodiereze i eritropoeze u periodu akutne posthemoragijske anemije: dr. sc. dis. …kand. med. nauke. - Minsk, 1968.

8. Rahimov A.A., Bairamalibeyli I.E.. // Osnove dijagnoze, prevencije i liječenja anemije. - M.: GOU VUNMTs Ministarstva zdravlja Ruske Federacije, 2002. - S. 204-209.

9. Čumakova E.D.. // Stvarni problemi hematologija i transfuziologija: materijali VI Kongresa hematologa i transfuziologa Republike Belorusije, Minsk, 24-25. maja 2007. / ur. A.I. Svirnovsky, M.P. Potapnjev. - Minsk: Republički naučno-praktični centar za hematologiju i transfuziologiju, 2007. - S. 50.

10. Coombs R., Mourant A., Race R. // Lancet. - 1945. - Vol. 2. - str. 15.

11. Freedman J. // J. Clin. Pathol. - 1979. - Vol. 32. - P. 1014-1018.

12. Holburn A.M. kontrola kvaliteta. Metode u hematologiji / ur. I. Cavill. - Edinburg: Churchill Livingstone, 1982. - Vol. 4. - P. 34-50.

13. Khan S.// CMAJ. - 2006. - Vol. 175, br. 8. - Str. 919.

14. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Vol. 63 (dodatak 7). - P. 719-721.

15. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Vol. 63 (dodatak 7). - P. 716-718.

16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F.// New Engl. J. Med. —1976. — Vol. 277. - P. 123-125.

17. Muirhead E.E., GrovesM., Brian S. // J. Lab. Clin. Med. —1954. — Vol. 44. - P. 902-903.

18. Rosse W.F.//Hosp. Prac. - 1995. - N 105.

19. Voak D., Downie D., Mooreb. et al. //Biotests Bull. - 1986. - Vol. 1. - P. 41-52.

20. Voak D., Haigh T., Downie D. et al. Mašine za pranje ćelija za antiglobulinske testove. Ponovljeno testiranje - nova metoda koja pokazuje neefikasnost jedne široko korišćene mašine - Sorvall CW1-AF2: izveštaj tehničkom ogranku DHSS, februar 1991.

21. Williams M.E., Thomas D., Harman C.P. et al. //Antimikrobna sredstva i kemoterapija. -1985. - str. 125-127.

22. Zarandona J.M., Yazer M.H. // CMAJ. - 2006. - Vol. 174, br. 3. - P. 305-307.

Medicinske vijesti. - 2008. - br. 3. - S. 33-36.

Pažnja! Članak je namijenjen medicinskim specijalistima. Ponovno štampanje ovog članka ili njegovih fragmenata na Internetu bez hiperveze na izvorni izvor smatra se kršenjem autorskih prava.

Coombsov test- analiza za otkrivanje antitela vezanih za površinu ili rastvorenih u plazmi. Uz njegovu pomoć otkrivaju se imunizacija i antitijela na crvena krvna zrnca. Drugi naziv je antiglobulinski test. To se dešava direktno i indirektno.

At direktan antiglobulinski test otkriva antitijela fiksirana na površini eritrocita. Provodi se pod sumnjom na druge autoimune bolesti, nakon uzimanja lijekova (metildopa, penicilin, kinin) i.

Eritrociti su in vivo senzibilizirani - antitijela su već čvrsto vezana za njih, a dodatak antiglobulinskog seruma (anti-IgG) uzrokuje da se senzibilizirane stanice slijepe, što je vidljivo golim okom.

Indirektni Coombsov test otkriva antieritrocitna antitijela u krvnoj plazmi, radi se prije transfuzije krvi i tokom.

Anti-eritrocitna antitijela - vrsta autoantitijela, tj. antitela protiv sopstvenog tkiva. Autoantitijelo nastaje kada je imunološki sistem abnormalno reaktivan na određene lijekove, kao što su visoke doze penicilina.

Eritrociti na svojoj površini sadrže različite hemijske strukture (glikolipide, saharide, glikoproteine ​​i proteine), koje se u medicini nazivaju antigeni. Osoba nasljeđuje od svojih roditelja određenu mapu antigena na svakom crvenom krvnom zrncu.

Antigeni se kombinuju u grupe i pored toga se krv deli na nekoliko grupa - po sistemu AB0, Rh, Kell, Lewis, Kidd, Duffy. Najpoznatiji i najznačajniji u radu ljekara su AB0 i Rh faktor (Rh).

AB0 sistem

Rh-pripadnost osobe određena je prisustvom ovih antigena. Posebno važan eritrocitni antigen je antigen D. Ako je prisutan, onda govore o Rh-pozitivna krv RhD, a ako nije - o Rh negativan Rhd.

Ako se odgovarajuće antitijelo pridruži antigenima eritrocita, tada je eritrocit uništen - bit će hemoliza.

Indikacije

Glavna indikacija za direktnoantiglobulinski test- Sumnja na hemolitičku anemiju. Najčešće se provodi kod primarne autoimune hemolitičke anemije, hemolize kod reumatske, tumorske, zarazne bolesti hemoliza izazvana lijekovima.

Ako se anemija pojavi nekoliko dana ili mjeseci nakon transfuzije krvi ili uz produženu žuticu kod novorođenčeta, radi se i direktan Coombsov test.

Indirektnourađen antiglobulinski test prije transfuzije krvi i tokom trudnoće Rh negativne žene.

Autoimuna hemolitička anemija

Autoimuna hemolitička anemija (primarna) je klasična autoimuna bolest nepoznatih uzroka. Interakcija unutar imunološkog sistema je poremećena, što dovodi do percepcije sopstvenih eritrocita kao stranih. U limfnim čvorovima se sintetišu antitela klase IgG (reaguju na t 37 °C) i/ili IgM (na t 40 °C), koja, kada se pričvrste na površinu eritrocita, pokreću niz enzima ( komplementa) i „perforiraju“ zid eritrocita, što dovodi do njegovog uništenja – hemolize.

Prvi simptomi nastaju zbog uništavanja crvenih krvnih stanica i smanjenja hemoglobina. Među njima:

• umor, opšta slabost, razdražljivost
• dispneja
• bol u stomaku i grudima, mučnina
• tamne boje urina
• bol u leđima
• ikterična obojenost kože i sluzokože
• smanjenje broja eritrocita i

pozitivan direktan rezultat Coombsov test 100% potvrđuje dijagnozu autoimune hemolitičke anemije, što dokazuje njeno autoimuno porijeklo. Istovremeno, negativan rezultat ne omogućava uklanjanje dijagnoze.

Sekundarna hemolitička anemija

Sekundarna autoimuna hemolitička anemija i pozitivan Coombsov test mogu biti sa sljedećim bolestima:

• Evansov sindrom
• infekcija pneumonijom

Pozitivan antiglobulinski test kod ovih bolesti je jedan od simptoma, a ne dijagnostički kriterij.

Hemolitička bolest novorođenčeta

Uzrok hemolitička bolest novorođenčeta nekompatibilnost krvne grupe kod majke i fetusa, u većini slučajeva prema Rh sistemu, u pojedinačnim slučajevima - po sistemu AB0, kazuistički - prema drugim antigenima.

Rh-konflikt se razvija ako je kod Rh negativne žene fetus naslijedio Rh-pozitivnu krv od svog oca.

Bolest se kod novorođenčeta razvija samo ako je majka već razvila antitijela na odgovarajuće antigene, što se događa nakon prethodnih trudnoća, pobačaja, transfuzije nekompatibilne krvi. Većina zajednički uzrok pokretanje sinteze antitela na antigene membrane eritrocita - porođaj (feto-maternalno krvarenje). Prvi porođaji uglavnom prolaze bez komplikacija, ali kasniji porođaji su prepuni hemolitičke bolesti novorođenčeta u prvim danima nakon rođenja.

Simptomi hemolitičke bolesti novorođenčeta:

• žutilo kože
• , i sluzokože
• povećanje jetre i slezene
• respiratorni poremećaji
• oticanje celog tela
• ekscitacija i postepena depresija centralnog nervnog sistema

Anemija nakon transfuzije krvi

Indirektni Coombsov test provedeno prije transfuzije krvi radi procjene kompatibilnosti, i direktni Coombsov test - nakon njega ako se sumnja na posttransfuzijsku hemolizu, tj. ako imate simptome kao što je groznica, zalijevanje (pročitajte u nastavku). Svrha testa je otkrivanje antitijela na transfuzirane eritrocite koji su se vezali za eritrocite primaoca i uzrok su posttransfuzijske hemolize, kao i preranog uklanjanja eritrocita donora iz cirkulacije primaoca (primaoca).

Simptomi:

• povećanje telesne temperature
• osip na koži
• bol u leđima
• crvena
• mučnina
• vrtoglavica

Dešifrovanje

Vrijedi podsjetiti da su osnovna pravila za dekodiranje direktnih i indirektnih antiglobulinskih testova ista. Jedina razlika je lokacija antitijela - u krvi ili već na eritrocitu.

• Ako direktni Coombsov test je negativan- to znači da antitijelo ne "sjeda" na eritrocite i uzrok simptoma treba dalje tražiti i provoditi indirektni uzorak Coombs
• ako se nakon transfuzije krvi, infekcija, lijekova otkrije pozitivan rezultat Coombs testa - pozitivnost traje do 3 mjeseca (životni vijek eritrocita 120 dana - 3 mjeseca)
• pozitivan rezultat testa na antiglobulin autoimuna bolest traje mesecima pa čak i godinama

Norm

• direktan Coombsov test - negativan
• indirektni Coombsov test - negativan

Kvalitativno, pozitivan rezultat se mjeri brojem pluseva od jedan do četiri (+, ++, +++, ++++), a kvantitativno u digitalnom obliku - 1:16, 1:256, itd.

Da. Činjenica da ste dobili transfuziju krvi mora biti poznata Vašem ljekaru, jer to sada utiče na ispravno tumačenje rezultata testa. Prilikom primanja tuđe (iako mnogo puta testirane krvi), uvijek postoji mogućnost da vaše tijelo razvije antitijela protiv transfuzirane krvi. Upravo će ta antitijela negativno utjecati na zdravlje. Uz naknadne transfuzije krvi, doktor bi trebao znati da ste već primili transfuziju, što znači da je bilo vremena za sintezu antitijela. Za trudnice su ove informacije još relevantnije.

3. Ako postoji neusklađenost Rh faktora između majke i djeteta, da li će sva djeca biti bolesna?

Zavisi od toga da li je dijete Rh-pozitivno ili negativno (RhD). Nosioci krvnih grupa I, II, III i IV mogu biti i Rh-pozitivni i negativni. U situaciji kada je majka Rh-negativna, a dijete Rh-pozitivno, antitijela će se proizvoditi već pri prvoj trudnoći, ali tek nakon prvog porođaja (ili prekida trudnoće) doći će do direktnog kontakta između krvi majka i dijete. Implementacija hemolitičkog efekta antitijela bit će tek u drugom i narednim porođajima, što će dovesti do hemolitičke bolesti kod novorođenčeta.

Svaku ženu sa negativnim Rh faktorom treba pažljivo pregledati tokom trudnoće, a nakon porođaja, preventivni tretman kako bi se spriječila pojava antitijela i daljnje komplikacije.

4. Da li je tokom trudnoće potrebno znati krvnu grupu muža prije nego što se uradi Coombs test?

Potrebno je ne samo znati, već i provjeriti krvnu grupu biološkog oca djeteta tokom trudnoće.

Podaci

• prvi put predložen na Kembridžu 1945
• prag osjetljivosti - najmanje 300 fiksiranih molekula antitijela na jednom eritrocitu
• broj antitijela koja pokreću hemolizu - pojedinačno za svaku osobu (od 16-30 do 300)
• dinamika drugih laboratorijskih pokazatelja hemolitičke anemije (hemoglobin, bilirubin, retikulociti) može se normalizirati, a Coombsov test će ostati na istom nivou

Coombsov test je zadnji put izmijenjen: 16. marta 2018. od strane Maria Bodyan

Na tanjir ili predmetno staklo nanosi se pipetama (različitim!) 1 velika kap O (I), A (II), B (III) seruma. Primetivši vreme, čistom staklenom šipkom ili čistim uglom staklenog tobogana, kapi seruma se kombinuju sa kapima krvi. Određivanje traje 5 minuta, protresanje ploče, zatim se u svaku mješavinu kapi doda 1 kap fiziološkog rastvora i rezultati se procjenjuju. Bolje je da je serum 2 različite serije. Rezultati krvne grupe moraju se podudarati u obje serije seruma.

Procjena rezultata izohemaglutinacije:

izohemaglutinacija. Uz pozitivnu reakciju, u smjesi se pojavljuju sitna crvena zrnca lijepljenih crvenih krvnih zrnaca. Zrna se spajaju u veća zrna, a ova u ljuspice. Serum je skoro bezbojan;

s negativnom reakcijom, smjesa ostaje ravnomjerno obojena ružičastom 5 minuta i ne otkrivaju se zrna;

pri radu sa 3 seruma grupa O(I), A(II), B(III) moguće su 4 kombinacije reakcija:

1. ako su sva 3 seruma dala negativnu reakciju, odnosno smjesa je ravnomjerno obojena ružičasto - to je O (I) krvna grupa;

   ako je samo serum grupe A (II) dao negativnu reakciju, a serumi O (I) i B (III) pozitivnu reakciju, odnosno pojavila su se zrna - to je A (II) krvna grupa;

   serum B(II) grupe je dao negativnu reakciju, a serumi O(I) i A(II) grupe su dali pozitivnu reakciju - to je B(III) krvna grupa.

sva 3 seruma dala su pozitivne reakcije - testirana krv AB (IV) grupe. U ovom slučaju se provodi studija sa serumom AB (IV) grupe.

Bilješka! Kapljice ispitivane krvi trebale bi biti 5-10 puta manje od kapi seruma.

Greške izohemaglutinacije.

Ne aglutinacija tamo gdje bi trebala biti i aglutinacija tamo gdje ne bi trebala biti. Ovo može biti zbog niskog titra seruma plus slabe aglutinacije eritrocita.

Prisustvo aglutinacije tamo gdje ne bi trebalo biti- ovo je pseudoaglutinacija, kada hrpe eritrocita formiraju "konečiće". Ljuljanje ploče ili dodavanje fiziološke otopine ih uništava.

Panaglutinacija, kada serum spaja sva crvena krvna zrnca, uključujući i vlastitu krvnu grupu. Do 5. minute nestaju znaci aglutinacije.

Postoji i takozvana hladna panaglutinacija, kada se eritrociti spajaju zbog niske temperature vazduha (ispod 15°C) u prostoriji.

U svim ovim slučajevima se provodi ili ponovljena reakcija, ili prema standardnim eritrocitima.

Određivanje Rh-pripadnosti krvi

Za utvrđivanje Rh pripadnosti, odnosno za otkrivanje prisustva ili odsustva antigena Rh sistema u krvi ljudi, koriste se standardni anti-Rhesus serumi (reagensi) koji su različiti po specifičnosti, odnosno sadrže antitela u odnosu na raznih antigena ovog sistema. Za određivanje Rh 0 (D) antigena najčešće se koristi antirezus serum uz dodatak 10% rastvora želatine ili se koristi standardni antirezus reagens pripremljen unapred sa 33% rastvorom poliglucina. Za dobivanje preciznijih rezultata studije, kao i za otkrivanje antigena drugih seroloških sistema, koristi se Coombsov test (također je vrlo osjetljiv u određivanju kompatibilnosti transfuzirane krvi). Za ispitivanje se koristi nativna krv ili pripremljena sa nekom vrstom konzervansa. U tom slučaju krv treba isprati od konzervansa desetostrukom zapreminom izotonični rastvor natrijum hlorida. Prilikom utvrđivanja Rh-pripadnosti- Rh 0 (D) treba koristiti dva uzorka seruma ili anti-Rhesus reagensa dvije različite serije i istovremeno koristiti standardne eritrocite dobijene iz krvi iz krvi Rh-pozitivnih (Rh+) i Rh-negativnih (Rh - ) pojedinci. Prilikom određivanja drugih izoantigena u skladu s tim treba koristiti kontrolne eritrocite koji sadrže ili nemaju antigen protiv kojeg su usmjerena antitijela u standardnom serumu.

Nepotpuni toplotni aglutinini su najčešći tip antitijela koja mogu uzrokovati razvoj autoimune hemolitičke anemije. Ova antitijela pripadaju IgG, rijetko - IgM, IgA.

COOMBS TEST

Coombsov test: uvod. Coombsov test je laboratorijska dijagnostička metoda zasnovana na reakciji hemaglutinacije.

Glavna metoda za dijagnosticiranje autoimune hemolitičke anemije je Coombsov test. Zasniva se na sposobnosti antitijela specifičnih za imunoglobuline (posebno IgG) ili komponente komplementa (posebno C3) da aglutiniraju eritrocite obložene IgG ili C3.

Vezivanje IgG i C3b za eritrocite uočeno je kod autoimune hemolitičke anemije i imunohemolitičke anemije izazvane lijekovima. Direktan Coombsov test. Direktni Coombsov test se koristi za otkrivanje antitijela ili komponenti komplementa fiksiranih na površini crvenih krvnih stanica. Izvodi se na sljedeći način:

Da bi se dobila antitijela na humane imunoglobuline (antiglobulinski serum) ili komplementar (antikomplementarni serum), životinja se imunizira ljudskim serumom, imunoglobulinima ili ljudskim komplementom. Serum dobiven od životinje se pročišćava od antitijela na druge proteine.

Pacijentovi eritrociti se ispiru fiziološkom otopinom kako bi se potpuno uklonio serum, koji neutralizira antitijela na imunoglobuline i komplement i može uzrokovati lažno negativan rezultat.

Ako su antitijela ili komponente komplementa fiksirane na površini eritrocita, dodavanje antiglobulina ili antikomplementarnog seruma uzrokuje aglutinaciju eritrocita.

Direktni Coombsov test se koristi u sljedećim slučajevima:

autoimuna hemoliza.

Hemolitička bolest novorođenčeta.

Imunološka hemolitička anemija izazvana lijekovima.

Hemolitičke transfuzijske reakcije. Indirektni Coombsov test. Indirektni Coombsov test otkriva antitijela na eritrocite u serumu. Da bi se to postiglo, pacijentov serum se inkubira sa donorskim eritrocitima grupe 0, a zatim se radi direktan Coombsov test.

Indirektni Coombsov test se koristi u sljedećim slučajevima:

Određivanje individualne kompatibilnosti krvi davaoca i primaoca.

Detekcija aloantitijela, uključujući antitijela koja uzrokuju hemolitičke transfuzijske reakcije.

Određivanje površinskih eritrocitnih antigena u medicinskoj genetici i sudskoj medicini.

Potvrda identičnih blizanaca u transplantaciji koštane srži.

Za provođenje biološkog testa, krv se transfuzira što je brže moguće (po mogućnosti mlazom). Nakon transfuzije 25 ml krvi, cijev sistema se steže stezaljkom. Zatim se pravi pauza od 3 minuta, tokom koje se prati stanje primaoca. Za postavljanje biološkog uzorka ubrizgava se tri puta po 25 ml krvi. Na kraju testa (nakon transfuzije prvih 75 ml krvi u frakcionim dozama od 25 ml u intervalima od 3 minute), sistem se podešava na potrebnu brzinu transfuzije. Prilikom transfuzije pacijentu s više od jedne bočice krvi, potrebno je izvaditi iglu iz vene. U tom slučaju, igla se izvadi iz epruvete bočice u kojoj je krv istekla i umetne se u sljedeću bočicu. Sistemska cijev (gumena ili plastična) je u ovom trenutku stegnuta stezaljkom. Ako tokom transfuzije krvi postoji potreba za intravenskom primjenom nekog drugog lijeka primaocu, to se radi probijanjem gumene cijevi sistema. Probijanje plastične cijevi je neprihvatljivo, jer ne otpada. Nakon svake transfuzije krvi, pacijent se mora nadzirati kako bi se identificirao i na vrijeme eliminirao moguće komplikacije uključujući i alergijske reakcije. Tjelesnu temperaturu treba izmjeriti 2 sata nakon završetka transfuzije krvi. Sa povećanjem njegovog mjerenja mora se ponoviti u naredna 4 sata svakih sat vremena. Jednako je važno praćenje mokrenja i sastava urina, što omogućava utvrđivanje prisutnosti toksične posttransfuzijske reakcije. Pojava oligurije i anurije nakon transfuzije krvi, prisustvo krvnih zrnaca i proteina u urinu direktan su pokazatelj razvoja posttransfuzijske hemolize.