Značenja i definicije Coombsovog suđenja. Coombsov test u dijagnostici hemolitičke bolesti novorođenčeta

Coombsov test je klinička analiza test krvi, koji se radi kako bi se utvrdilo da li krv sadrži određena antitijela koja mogu biti nesigurna. Ova antitijela se lijepe za crvena krvna zrnca i mogu napasti imunološki sistem i oštetiti na druge načine. U medicinskoj terminologiji, ovaj test se naziva i antiglobulinski test (AGT).

Vrste Coombsovih testova

Postoje dvije vrste Coombsovog testa - direktni i indirektni.

Direktan Coombsov test, također poznat kao direktni (DAT), otkriva auto-antitijela koja se vezuju za površinu crvenih krvnih zrnaca. Ova antitijela se ponekad stvaraju u tijelu zbog određenih bolesti ili prilikom uzimanja određenih lijekova, kao što su prokainamid, metildopa ili kinidin.

Ova antitijela su opasna jer ponekad uzrokuju anemiju uništavanjem crvenih krvnih stanica.

Ovaj test se ponekad propisuje za dijagnosticiranje uzroka žutice ili anemije.

Normalno, Coombsova reakcija je negativna.

Pozitivno za:

• hemolitička bolest novorođenčeta;
• autoimuna hemoliza;
• hemolitičke transfuzijske reakcije;
• imunohemolitička anemija izazvana lijekovima.

Indirektni test Coombs, također poznat kao , koristi se za otkrivanje antitijela na crvena krvna zrnca sadržana u krvnom serumu (serum je bistra žuta krvna tekućina koja ostaje nakon što se crvena krvna zrnca i koagulans izluče).

Indirektni Coombsov test se koristi u transfuziji krvi kako bi se utvrdilo da li krv davaoca odgovara krvi primatelja. Ovo se zove test kompatibilnosti i pomaže u sprečavanju bilo kakve štetne reakcije na krv davaoca. Ova analiza se preporučuje i trudnicama. Neke žene imaju IgG antitijela koja mogu proći kroz placentu u fetus i oštetiti novorođenče, uzrokujući hemolitičku bolest poznatu kao hemolitička anemija.

Procedura

Krv se uzima pomoću šprica iz vene, obično sa stražnje strane šake ili u pregibu lakta. Mjesto uboda se prije toga temeljito dezinficira, a nakon uzimanja krvi stavlja se čista gaza ili vata.

Dobivena krv se pročišćava u laboratoriju, a crvena krvna zrnca se odvajaju. Uzorak se zatim uzastopno ispituje upotrebom različitih seruma i Coombsovih reagensa, što se suprotstavlja. Ako nema aglutinacije (skupljanje crvene boje krvne ćelije), što znači pozitivan rezultat.

Međutim, ako je test negativan, to znači da u krvi postoje antitijela koja djeluju protiv crvenih krvnih stanica. Ovo može ukazivati razne bolesti kao što je anemija (bilo prirodna ili uzrokovana lijekovima), sifilis ili infekcija mikoplazmama. Nakon dobijanja rezultata lekar će propisati odgovarajući tretman.

Video

Coombsov test je specifičan laboratorijski test koji otkriva antitijela prisutna u ili na površini crvenih krvnih zrnaca. Ovaj postupak omogućava dijagnosticiranje imunološkog sistema, uključujući i novorođenčad, kao i identifikaciju hemolitičkih transfuzijskih reakcija. Coombsov test se aktivno koristi u sudskoj medicini i naučnoj genetici za određivanje antigena eritrocita. Usklađenost sa svim pravilima za provedbu takve analize omogućava vam da dobijete najpouzdaniji rezultat.

Svrha antiglobulinskog testa

Direktni Coombsov test vam omogućava da otkrijete anti-eritrocitna antitijela koja su fiksirana na crvenim krvnim zrncima. Pozitivna reakcija u takvoj studiji ukazuje na razvoj autoimunosti.Treba napomenuti da negativan rezultat ne isključuje prisustvo, jer su antitijela često u slobodnom obliku, odnosno nemaju veze sa crvenim krvnim zrncima. U takvim slučajevima, preporučljivo je provesti indirektni Coombsov test, koji će vam omogućiti da odredite autonomne supstance u

Kako se vrši analiza?

Uzimanje venske krvi kod pacijenta se vrši ujutro na prazan želudac, uprkos činjenici da nisu pronađeni značajni faktori koji utiču na konačni rezultat ovakvog testa. Dozvoljeno je čuvanje uzetog materijala na temperaturi od 2 do 8 °C ne duže od sedam dana. Da bi ova studija bila što preciznija, puna krv mora biti dostavljena u laboratoriju u prva dva sata. U idealnom slučaju, Coombsov test bi trebao pokazati negativan rezultat, što ukazuje na odsustvo hemolitičkih promjena u tijelu.

Dešifrovanje zbroja

Coombsov test je prilično dugotrajna istraživačka metoda koja zahtijeva pažljivo i precizno izvođenje. Prilikom korištenja takvog testa mogu postojati određene poteškoće koje su povezane s pogrešnom interpretacijom konačnih rezultata zbog slabe manifestacije pozitivnih reakcija. Treba napomenuti da nepouzdanost analize – odnosno pozitivan Coombsov test – može biti rezultat neefikasnog ispiranja eritrocita, kontakta sa masnim
površine, kao i neutralizacija antiglobulinskih reagensa komponentama

serum. Još jedan nedostatak ove metode istraživanja je nestabilnost uzetog materijala, čije skladištenje ima određene karakteristike.

Lažno negativan rezultat može biti uzrokovan pretjeranim mućkanjem suspenzije eritrocita tokom resuspenzije. Pogrešni rezultati mogu biti i zbog prisustva kontaminanata antikomplementarnih antitijela koji se adsorbiraju tokom inkubacije na površini testiranih eritrocita, što rezultira pojavom pozitivnog rezultata. Ako se testni uzorci temeljito isperu i kontroliraju uvjeti reakcije, ovi nedostaci se mogu lako otkloniti, što će povećati šanse za dobivanje najpouzdanijih pokazatelja Coombsovog testa.

Coombsov test

Coombsov test- antiglobulinski test koji ima za cilj otkrivanje u Rh-negativnoj krvi nepotpunih antieritrocitnih antitijela na Rh faktor - specifični protein koji se nalazi na površini eritrocita Rh-pozitivne krvi. Postoje dvije vrste ovog testa: direktan - otkrivanje antitijela na površini crvenih krvnih zrnaca, indirektni - otkrivanje antitijela u krvnom serumu. Direktan test se provodi u dijagnostici i praćenju liječenja bolesti krvi: hemolitičke anemije, hemolitičke bolesti novorođenčeta i drugih. Indirektni test se radi radi procene kompatibilnosti krvi davaoca i primaoca tokom transfuzije, kao i utvrđivanja prisustva i rizika od Rh konflikta prilikom planiranja i vođenja trudnoće. Materijal za Coombsov test je venska krv, studija se provodi metodama zasnovanim na reakciji aglutinacije. Obično oba testa daju negativan rezultat. Analiza se radi u roku od jednog dana.

Coombsov test - kliničkim ispitivanjima Rh-negativna krv, usmjerena na otkrivanje antitijela na Rh faktor. Test se koristi za identifikaciju rizika od razvoja rezus konflikta i hemolitičkih reakcija. U svakoj osobi, površina eritrocita sadrži određeni skup antigena ili aglutinogena - jedinjenja različite prirode, čije se prisustvo ili odsustvo koristi za procjenu krvne grupe i Rh faktora. Postoji mnogo vrsta antigena, u medicinskoj praksi, aglutinogeni A i B, koji određuju krvnu grupu, a od najvećeg su praktičnog značaja aglutinogen D, Rh faktor. S pozitivnim Rh faktorom, D antigeni se otkrivaju na vanjskoj membrani eritrocita, s negativnim - ne.

Coombsov test, koji se naziva i antiglobulinski test, ima za cilj otkrivanje nepotpunih antieritrocitnih antitijela na sistem Rh faktora u krvi. Antitijela na Rh faktor su specifični imunoglobulini koji se stvaraju u Rh negativnoj krvi kada u nju uđu eritrociti sa aglutinogenima D. To može nastati kada se pomiješa krv fetusa i trudnice, pri čemu se transfuzije krvi rade bez prethodne tipizacije krvi. Coombsov test postoji u dvije verzije - direktnoj i indirektnoj. Prilikom izvođenja direktnog Coombsovog testa otkrivaju se antitijela pričvršćena na površinu crvenih krvnih zrnaca. Studija se koristi za određivanje uzroka hemolitičke reakcije. Indirektni Coombsov test je usmjeren na otkrivanje anti-eritrocitnih antitijela u krvnoj plazmi. Potrebno je utvrditi kompatibilnost krvi davaoca i primatelja ili majke i fetusa, pomaže u sprječavanju razvoja rezus konflikta i naknadne hemolize crvenih krvnih zrnaca.

Krv za obje varijante Coombsovog testa uzima se iz vene. Analiza se vrši metodom aglutinacije uz korištenje antiglobulinskog seruma. Rezultati istraživanja koriste se u hematologiji u identifikaciji uzroka hemolitičkih reakcija, u hirurgiji i reanimaciji pri transfuzijama krvi, u akušerstvu i ginekologiji u praćenju trudnoće kod žena sa Rh negativnom krvlju.

Indikacije

Direktni Coombsov test, koji otkriva antitijela pričvršćena na površinu crvenih krvnih zrnaca, propisan je za hemolitičke reakcije (razaranje crvenih krvnih stanica) različitog porijekla. Studija je indicirana za primarnu autoimunu hemolitičku anemiju, posttransfuzijsku hemolitičku anemiju, hemolitičku bolest novorođenčeta, hemolizu eritrocita uzrokovanu autoimunim, tumorskim ili zarazne bolesti, kao i primanje lijekovi npr. kinidin, metildopa, prokainamid. Indirektni Coombsov test, koji otkriva antitijela u krvnoj plazmi, koristi se za sprječavanje razvoja rezus konflikta. Indiciran je za pacijente koji se pripremaju za transfuziju krvi, kao i za trudnice sa negativnim Rh faktorom, pod uslovom da budući otac djeteta ima pozitivan Rh faktor.

Kako bi se utvrdila Rh kompatibilnost, Coombsov test se ne primjenjuje kod pacijenata s Rh-pozitivnom krvlju. U tim slučajevima već postoje antigeni na površini crvenih krvnih zrnaca, proizvodnja antitijela se ne može pokrenuti transfuzijom krvi ili ulaskom krvi fetusa u krvotok trudnice. Također, studija nije indicirana za trudnice ako oba roditelja imaju negativan Rh faktor, nasljednu recesivnu osobinu. Dijete u takvim parovima uvijek ima Rh negativnu krv, imunološki sukob sa majkom je nemoguć. Kod hemolitičkih patologija, antiglobulinski test se ne koristi za praćenje uspješnosti terapije, jer rezultati ne odražavaju aktivnost procesa uništavanja eritrocita.

Ograničenje Coombsovog testa je složenost istraživačkog postupka - da bi se dobili pouzdani rezultati, potrebno je pridržavati se temperaturnih i vremenskih uslova, pravila za pripremu reagensa i biomaterijala. Prednost Coombsovog testa je njegova visoka osjetljivost. Kod hemolitičke anemije rezultati ove analize ostaju pozitivni, čak i ako se hemoglobin, bilirubin i retikulociti normaliziraju.

Priprema za analizu i prikupljanje materijala

Materijal za izvođenje Coombsovog testa je venska krv. Ne postoje posebni zahtjevi za vrijeme uzimanja uzorka krvi i za pripremu pacijenta. Kao i kod svake studije, preporučuje se da napravite pauzu nakon jela od najmanje 4 sata, a u posljednjih 30 minuta da prestanete pušiti, fizička aktivnost izbjegavajte emocionalni stres. Također je vrijedno unaprijed razgovarati sa svojim liječnikom o potrebi prestanka uzimanja lijekova - neki lijekovi mogu iskriviti rezultate Coombsovog testa. Krv se vadi štrcaljkom iz kubitalne vene, rjeđe iz vene na stražnjoj strani šake. U roku od nekoliko sati materijal se dostavlja u laboratoriju.

Prilikom izvođenja direktnog Coombsovog testa, serumu krvi pacijenta dodaje se antiglobulinski serum. Nakon nekog vremena, smjesa se ispituje na prisustvo aglutinata - oni nastaju ako postoje antitijela na crvenim krvnim zrncima. Uz pozitivan rezultat, određuje se titar aglutinacije. Indirektni Coombsov test se sastoji od više koraka. Prvo, antitela prisutna u serumu se fiksiraju na ubrizganim eritrocitima tokom inkubacije. Zatim se uzorku dodaje antiglobulinski serum, nakon nekog vremena utvrđuje se prisustvo i titar aglutinata. Period analize je 1 dan.

Normalni rezultati

Obično je rezultat direktnog Coombsovog testa negativan (-). To znači da u krvi ne postoje antitijela povezana s crvenim krvnim zrncima i ne mogu biti uzrok hemolize. Normalan rezultat indirektni Coombsov test je također negativan (-), odnosno nema antitijela na Rh faktor u krvnoj plazmi. Prilikom pripreme za transfuziju krvi za primaoca to znači kompatibilnost sa krvlju davaoca, kod praćenja trudnoće - odsustvo Rh senzibilizacije majke, nizak rizik razvoj imunološkog konflikta. Fiziološki faktori kao što su prehrambene navike ili fizička aktivnost, ne može uticati na rezultat testa. Stoga, ako je rezultat pozitivan, potrebna je konsultacija s liječnikom.

Dijagnostička vrijednost analize

Pozitivan rezultat Coombs testa izražava se kvalitativno, od (+) do (++++), ili kvantitativno, u titrima od 1:16 do 1:256. Određivanje koncentracije antitijela na eritrocitima iu krvnom serumu vrši se u oba tipa uzoraka. Uz pozitivan rezultat direktnog Coombsovog testa, na vanjskoj membrani crvenih krvnih stanica otkrivaju se antitijela koja dovode do uništenja ovih krvnih stanica. Uzrok može biti transfuzija krvi bez prethodne tipizacije - posttransfuzijska hemolitička reakcija, kao i neonatalna eritroblastoza, hemolitička reakcija zbog upotrebe lijekova, primarna ili sekundarna autoimuna hemolitička anemija. Sekundarna destrukcija eritrocita može biti uzrokovana sistemskim eritematoznim lupusom, Evansovim sindromom, Waldenstrom makroglobulinemijom, paroksizmalnom hladnom hemoglobinurijom, hroničnom limfocitnom leukemijom, limfomom, infektivnom mononukleozom, sifilisom, mikoplazmom.

Pozitivan rezultat indirektnog Coombs testa ukazuje na prisustvo antitijela na Rh faktor u plazmi. U praksi to znači da je došlo do Rh senzibilizacije, postoji mogućnost razvoja Rh konflikta nakon infuzije krvi donora tokom trudnoće. Kako bi se spriječile komplikacije u trudnoći, žene s pozitivnim rezultatom Coombs testa stavljaju se u posebnu evidenciju.

Liječenje odstupanja od norme

Coombsov test se odnosi na izoserološke studije. Njegovi rezultati omogućavaju identifikaciju hemolitičke reakcije, kao i utvrđivanje kompatibilnosti krvi davaoca i primaoca, majke i fetusa, kako bi se spriječio razvoj rezus konflikta. Ako je rezultat testa pozitivan, tada je potrebno potražiti savjet liječnika - akušera-ginekologa, hematologa, kirurga.

Od mnogih postojećih antigena u medicinskoj praksi najveća vrijednost daju tri vrste aglutinogena u krvi. Jedan od njih je tip odgovoran za ispoljavanje Rh faktora: ako je prisutan na membrani eritrocita, dijagnostikuje se Rh + krvna grupa, ako je odsutna - Rh-. Ako eritrociti sa Rh + aglutinogeni uđu u sastav Rh negativne krvi, tijelo pokreće imunološki odgovor i počinje proizvoditi antitijela na ovaj antigen, što uzrokuje patološka stanja.

REFERENCA! Rh faktor je složen višekomponentni sistem od nekoliko desetina antigena. Najčešći od njih su aglutinogeni tipa D (85% slučajeva), kao i E i C.

Coombsov test se provodi samo u prisustvu direktnih indikacija. Opšta lista razloga za propisivanje Coombsovog testa:

• planiranje i vođenje trudnoće (roditelji imaju različit Rh);
• darivanje i priprema za transfuziju krvi (nepodudaranje krvi u Rh nije ništa manje štetno od neusklađenosti u sistemu AB0);
• planirano hirurška intervencija(u slučaju nadoknade gubitka krvi uz pomoć transfuzije krvi);
• dijagnoza hemolitičkih bolesti.

Specifičnije indikacije ovise o vrsti studije koja se provodi.

Direktan Coombsov test

Direktan test otkriva antitijela na površini crvenih krvnih zrnaca. Ovo je neophodno za dijagnozu postojećeg hemolitičke patologije:

• autoimune (eritrociti i hemoglobin su uništeni kao rezultat napada vlastitih antitijela);
• medicinski ( patološki proces počinje uzimati neke lijekovi tip kinidina ili prokainamida);
• nakon transfuzije (sa neusklađenošću krvne grupe tokom transfuzije), kao iu obliku Rh konflikta tokom trudnoće (eritroblastoza novorođenčadi).

REFERENCA! Hemolitička anemija je bolest povezana s preranim uništavanjem crvenih krvnih stanica kao rezultatom hemolize, što dovodi do nedovoljne zasićenosti krvi kisikom i hipoksije mozga i/ili unutarnjih organa.

Hemoliza krvnih elemenata uočava se kod onkoloških, infektivnih, reumatskih bolesti, pa se direktni Coombsov test može koristiti kao dodatno sredstvo za dijagnosticiranje patološkog stanja. Istovremeno, vrijedi zapamtiti: negativna vrijednost analize ne isključuje mogućnost hemolize, ali je razlog za dodatni pregled.

Indirektni Coombsov test

Indirektni test se češće koristi za prevenciju patoloških situacija. Pomaže u otkrivanju antitijela u krvnoj plazmi, što je neophodno za procjenu transfuzijske kompatibilnosti i dijagnosticiranje rizika od Rh konflikta tokom trudnoće.

Više od 80% ljudi ima pozitivan Rh faktor (Rh+), respektivno, nešto manje od 20% je Rh-negativno. Ako Rh- majka razvije Rh+ bebu, njeno tijelo počinje proizvoditi antitijela koja napadaju fetalna crvena krvna zrnca, uzrokujući hemolizu.

Uzimajući u obzir činjenicu da procenat „različitih-rezus“ brakova dostiže 12-15%, rizik od hemolitičke bolesti novorođenčeta trebao bi biti visok, ali u stvarnosti, samo u 1 od 25 takvih slučajeva kod žena, fenomen uočena je senzibilizacija (za 200 uspješnih porođaja 1 primjer hemolitičke patologije). Ovo je dijelom zbog činjenice da prvo Rh-pozitivno dijete obično ne izaziva otvorenu agresiju majčinog tijela; velika većina slučajeva javlja se kod druge i sljedeće djece. Primjenjuje se isti princip kao i kod konvencionalne senzibilizacije na određeni alergen.

Pri prvom kontaktu ne dolazi do reakcije. Tijelo se tek upoznaje sa novim antigenom za njega, stvarajući antitijela klase IgM, koja su odgovorna za brzi imunološki odgovor, ali rijetko prodiru kroz placentnu barijeru u krv djeteta. Sve patološke reakcije se manifestiraju pri ponovljenom „susretu“, kada se u tijelu počnu proizvoditi antitijela klase IgG, koja lako prodiru u krvotok fetusa, pokrećući proces hemolize.

Indirektni Coombs test tokom trudnoće omogućava vam da otkrijete prisustvo antitijela u majčinom tijelu i da ih na vrijeme identifikujete početna faza senzibilizacija. Za pozitivan odgovor potrebna je registracija uz mjesečnu studiju titra antitijela i obavezna hospitalizacija 3-4 sedmice prije porođaja.

REFERENCA! Inkompatibilnost Rh faktora ni na koji način ne utječe na stanje majke, hemolitička bolest se razvija samo kod djeteta. IN teški slučajevi a u nedostatku pravovremene reakcije, fetus može umrijeti u maternici ili odmah nakon rođenja.

Priprema za postupak i njegovo sprovođenje

Koristi se za dijagnostiku venska krv. Posebna dugoročna priprema za Coombsov test nije potrebna. Pokušajte slijediti standardni skup pravila prije uzimanja krvi iz vene za analizu:

• odustati od alkohola 3 dana, lijekovi(ako je moguće);
• planirajte posljednji obrok kasnije od 8 sati prije uzimanja krvi na analizu;
• odustati od pušenja, fizičkog, mentalnog i emocionalnog stresa za 1 sat;
• Prije zahvata popijte čašu čiste negazirane vode.

Metoda istraživanja zasniva se na reakciji hemaglutinacije.

Prilikom izvođenja direktnog testa uzorak krvi se izlaže prethodno pripremljenom antiglobulinskom serumu sa poznatim indikatorima, smjesa se drži neko vrijeme i provjerava da li ima aglutinata, koji nastaju kada su antitijela prisutna na eritrocitima. Nivo aglutinata se dijagnosticira pomoću aglutinirajućeg titra.

Indirektni test Coombs ima sličnu tehniku, ali složeniji slijed radnji. U izdvojeni krvni serum unose se antigeni eritrociti (sa Rh faktorom), a tek nakon ovih manipulacija dodaje se antiglobulinski serum za dijagnozu i titar aglutinata.

Rezultati istraživanja

Normalno, i direktno i indirektni Coombsov test treba dati negativan rezultat:

• negativan direktni test pokazuje da u krvi nema specifičnih antitijela na Rh faktor povezan s crvenim krvnim zrncima i ne mogu biti uzrok hemolize
• negativan indirektni test pokazuje da u krvnoj plazmi nema slobodnih antitijela na Rh faktor; činjenica ukazuje na kompatibilnost krvi davaoca s krvlju primaoca (ili krvlju majke i djeteta) prema Rh faktoru.

Pozitivan Coombsov test ukazuje na činjenicu Rh senzibilizacije tijela, što je glavni uzrok Rh konflikta u slučaju transfuzije krvi ili nošenja djeteta s drugačijim Rh statusom. U tom slučaju rezultati ostaju nepromijenjeni 3 mjeseca (životni vijek eritrocita). Ako je uzrok postala autoimuna hemolitička anemija, tada pozitivan test može progoniti pacijenta nekoliko godina (u nekim slučajevima doživotno).

REFERENCA! Antiglobulinski test je vrlo osjetljiv, ali ima malo informacija. Ne registruje aktivnost hemolitičkog procesa, ne određuje vrstu antitijela i nije u stanju identificirati uzrok patologije. Da bi se dobila potpunija slika, liječnik nužno propisuje dodatne studije (mikroskopija krvi, opća i biohemijska analiza, reumatski testovi, ESR, nivoi željeza i feritina).

Stepen senzibilizacije može imati kvalitativni izraz (od "+" do "++++") ili kvantitativan - u obliku natpisa:

• 1:2 - mala vrijednost, ne predstavlja opasnost;
• 1:4 - 1:8 - početak razvoja imunološke reakcije; ne predstavlja opasnost, ali zahtijeva stalno praćenje;
• 1:16 -1:1024 - jak oblik senzibilizacije, mere treba preduzeti odmah.

Razlog za pozitivan test može biti:

• transfuzija netipizirane krvi (ili sa greškom u tipkanju), kada se Rh faktor donora i primaoca ne poklapa;
• Rhesus konflikt tijekom trudnoće (ako se sastav krvnih antigena kod oca i majke ne poklapa);
• autoimuna hemolitička anemija – i kongenitalna (primarna) i sekundarna, koja je posljedica određenih bolesti (Evansov sindrom, infektivna pneumonija, sifilis, hladna hemoglobinurija, limfom);
• hemolitička reakcija na lijek.

Nijedan od gore navedenih problema pacijent ne može riješiti bez medicinsku njegu. U svim slučajevima bit će potrebna hitna konsultacija, registracija ili hitna hospitalizacija.

PAŽNJA! IN rijetki slučajevi Lažno pozitivan Coombsov test je moguć. Razlog tome mogu biti česte transfuzije krvi, kao i niz bolesti: reumatoidni artritis, eritematozni lupus, sarkoidoza. Također, ovaj fenomen se može primijetiti nakon uklanjanja slezine, kao i kod kršenja tijeka reakcije (često mućkanje sadržaja, prisustvo kontaminanata).

Antiglobulinski test dizajniran za otkrivanje nepotpunih anti-eritrocitnih antitijela predložili su Coombs, Morant, Reis 1945. godine, a kasnije je nazvan Coombsov test. Suština ove metode leži u činjenici da antiglobulinski serum koji sadrži antitijela na humane imunoglobuline, u reakciji sa eritrocitima koji su senzibilizirani sa nekompletnim antitijelima, dovodi do njihove aglutinacije.

Ovisno o tome da li su antitijela fiksirana na površini crvenih krvnih stanica ili su slobodna u krvnoj plazmi, koristi se direktni ili indirektni Coombsov test.

Direktan Coombsov test se izvodi u slučajevima kada postoji razlog za vjerovanje da su crvena krvna zrnca koja se proučavaju već in vivo su senzibilizirani odgovarajućim antitelima, tj. Prva faza reakcije - fiksacija antitijela na površini eritrocita - nastupila je u tijelu, a naknadno dodavanje antiglobulinskog seruma uzrokuje aglutinaciju senzibiliziranih stanica.

Koristeći indirektni Coombs test, otkrivaju se nepotpuna antitijela prisutna u test serumu. U ovom slučaju, reakcija se odvija u dvije faze. Prva faza je inkubacija test eritrocita sa test serumom, tokom koje se antitela sadržana u uzorku test seruma fiksiraju na površinu eritrocita. Druga faza je dodavanje antiglobulinskog seruma.

Do sada se Coombsov test široko koristio u laboratorijskoj praksi za dijagnozu imunopatoloških stanja, posebno kod autoimunih hemolitička anemija, koju karakterizira uništavanje eritrocita zbog vezivanja ćelijske membrane s antitijelima i (ili) komponentama sistema komplementa. Uz njegovu pomoć otkriva se prisustvo Ig G (obično Ig G1 i Ig G3) na membrani eritrocita, koji može aktivirati komplement, a ponekad i komplement (C3d). Međutim, u akutnom periodu bolesti, zbog uništavanja eritrocita, na kojima veliki broj antitijela, s hemolitičkom krizom, kao i sa nedovoljnom količinom antitijela u kroničnom toku bolesti, može se primijetiti negativan direktni Coombsov test.

Mora se naglasiti da ostaje indirektni Coombsov test najbolja metoda individualni odabir transfuzijskih medija, jer vam omogućava da najpreciznije odredite individualnu kompatibilnost donora i primatelja za antigene eritrocita.

Dodatni direktni antiglobulinski test na prisustvo autoantitela preporučuje se u pregledu svih primaoca organa i tkiva u pretransplantacionom periodu i primaoca hematopoetskih matičnih ćelija i nakon transplantacije.

Pored imunohematologije i transfuziologije, antiglobulinski testovi se široko koriste u dijagnostici niza patoloških stanja: kod hematoloških bolesti, uključujući i limfoproliferativna, u sistemske bolesti vezivno tkivo, Sjogrenova bolest, hronični aktivni hepatitis itd.

Coombsovi testovi se aktivno koriste u medicinskoj genetici i sudskoj medicini za određivanje površinskih antigena eritrocita.

Coombsov test je prilično dugotrajna istraživačka metoda koja zahtijeva posebnu pažnju u svojoj primjeni. Kada se koristi, postoje neke poteškoće povezane, posebno s tumačenjem slabo pozitivnih reakcija. Poznato je da lažne slabe pozitivne ili negativne reakcije pri izvođenju Coombsovih testova mogu biti rezultat nedovoljno efikasnog ispiranja eritrocita, neutralizacije antiglobulinskog reagensa tragovima seruma i kontakta sa neomašćenom površinom na koju se antiglobulin može fiksirati, gubi svoju aktivnost. Još jedan nedostatak Coombsovog testa je nestabilnost antiglobulinskog reagensa, čija priprema i skladištenje imaju određene karakteristike, što takođe otežava kvantifikaciju reakcije hemaglutinacije sa antiglobulinskim serumom.

Osim toga, studije koje su sproveli A. Holburn, D. Voak i dr. , pokazalo je da pretjerano tresenje tokom resuspendiranja suspenzije crvenih krvnih zrnaca može biti uzrok lažno negativnih rezultata. Pogrešni rezultati pri izvođenju antiglobulinskih testova mogu biti i zbog prisustva primesa antikomplementarnih antitela u antiglobulinskom reagensu, posebno na komponente komplementa C3d, C3c, C4c i C4d, koje se adsorbuju na površini test eritrocita tokom inkubacije i stvaraju pojava pozitivnog rezultata.

Ovi nedostaci se mogu lako otkloniti temeljnim pranjem uzoraka za ispitivanje i kontrolom uslova reakcije.

U posljednjoj deceniji, kako bi se smanjilo vrijeme izvođenja indirektnog Coombsovog testa i povećala njegova osjetljivost, izotonični rastvor niske jonske snage (LISS).

Neosporna prednost antiglobulinskih testova, prema brojnim autorima, je njihova visoka osjetljivost, koja znatno premašuje rezoluciju alternativne metode testovi koji se koriste za otkrivanje neaglutinirajućih antitijela.

Usporedili smo rezoluciju metoda za proučavanje krvnih seruma na prisustvo nekompletnih antitijela korištenjem poliglucinskog, želatinskog i antiglobulinskog seruma. U toku istraživanja praćeni su titri nekompletnih anti-D antitijela u 140 uzoraka seruma krvi izoimunih davalaca primjenom želatinskih, poliglukinskih i indirektnih antiglobulinskih testova. Prikaz ovih metoda je izvršen u skladu sa opšteprihvaćenim metodama.

Utvrđeno je da su metode za otkrivanje senzibilizacije eritrocita anti-D antitijelima u smislu rezolucije raspoređene na sljedeći način: najosjetljiviji je indirektni Coombsov test, zatim želatin test, a najmanje informativan poliglucinski test. Rezultati dobijeni u ovoj seriji eksperimenata u potpunosti odgovaraju podacima iz literature, što nam omogućava da zaključimo da je osjetljivost Coombsovih testova dovoljno visoka, što omogućava da se sa visokim stupnjem sigurnosti identificira prisustvo antieritrocitnih antitijela. u tijelu koje ne izazivaju aglutinaciju crvenih krvnih zrnaca.

Međutim, u praksi Coombsovih testova postoje slučajevi kada se ne otkriju nekompletna antitijela, iako klinička slika bolesti ili prethodna imunizacija ukazuje na njihovo moguće prisustvo. U takvim slučajevima može se pretpostaviti da količina antitijela nije dovoljna da bi se istaložila antiglobulinskim serumskim antitijelima.

Ovaj zaključak je potvrđen i vlastitim eksperimentom, u kojem je metodom analitičke mikroelektroforeze ćelija utvrđeno prisustvo anti-D antitijela na test eritrocitima, koja nisu otkrivena indirektnim Coombsovim testom. U ovoj seriji eksperimenata je eritrocitima, prethodno inkubiranim sa serumima dobijenim iz krvi imuniziranih donora, dodat antiglobulinski serum u periodu nastanka antitela u pokretu, tj. u periodu kada poznate metode, uključujući Coombsov test, nisu otkrile antitijela u njima.

U sprovedenim studijama, statistički je dokazano prisustvo nekompletnih antitela na površini eritrocita. značajna promjena vrijednosti elektroforetske pokretljivosti senzibiliziranih crvenih krvnih stanica nakon dodavanja antiglobulinskog seruma. Treba napomenuti da su naknadno otkrivena anti-D antitijela u krvnom serumu svih imuniziranih davalaca indirektnim Coombsovim testom.

Gillerand et al. također su pokazali da antiglobulinske testove karakterizira određeni prag osjetljivosti: pozitivan rezultat se bilježi samo kada je najmanje 500 Ig G molekula fiksirano na površini jednog eritrocita.

Osim toga, u literaturi postoje dokazi da mogući negativni Coombsov rezultat može biti posljedica niskog afiniteta antitijela koja senzibiliziraju crvena krvna zrnca, zbog čega se ona lako eluiraju s površine crvenih krvnih stanica tijekom pranja.

S obzirom na navedeno, može se zaključiti da u nekim slučajevima negativan rezultat Coombs testa još nije dokaz odsustva antitijela fiksiranih na površini eritrocita.

Poznato je da su Coombsove reakcije vrlo specifične i omogućavaju otkrivanje većine vrsta nepotpunih antitijela. Međutim, kako pokazuju neki eksperimentalni podaci, antiglobulinski testovi mogu biti pozitivni i u neimunološkim stanjima. E. Muirhead et al. drugog dana nakon primjene fenilhidrazina, psi su imali pozitivan Coombsov test. Ovako brza pojava pozitivne reakcije svedoči protiv njene imunološke prirode, već je povezana sa nespecifičnom adsorpcijom proteina na površini eritrocita.

M. Williams et al. utvrdili da klavulanska kiselina može izazvati i pozitivnu reakciju, koja je, prema autorima, povezana s nespecifičnom adsorpcijom proteina plazme na površini eritrocita. Sličan efekat je uočen i pri liječenju cefalosporinskim antibioticima.

Autori navedenih studija ističu neimunološku prirodu dobijenih pozitivnih rezultata Coombsovih testova i insistiraju na tome da su ove supstance sposobne da izazovu modifikaciju membrane crvenih krvnih zrnaca, usled čega eritrociti mogu da adsorbuju proteine ​​(posebno, albumin), koji su normalno prisutni u krvnoj plazmi i ne posjeduju svojstva antitijela. Osim toga, moguće je da upravo ksenobiotik, adsorbiran na površini stanice, služi kao veza između stanične membrane i proteina plazme.

Za pravilno tumačenje rezultata postavljanja antiglobulinskih testova treba uzeti u obzir i kvantitativni odnos mladih i zrelih eritrocita u perifernoj krvi. Utvrđeno je da se retikulociti izolovani iz organizma tokom perioda pojačane regeneracije eritrona mogu aglutinirati antiglobulinskim serumom.

Pozitivan rezultat direktnog antiglobulinskog testa Koristi se i kod raznih patoloških stanja praćenih poremećajima imunološki sistem, upalnih procesašto dovodi do nespecifične adsorpcije antitijela različite specifičnosti na membrane eritrocita. Ovo sugerira da molekuli Ig G ne stupaju u interakciju s njima specifični antigeni eritrociti, ali samo fiksirani na površini proučavanih stanica.

Treba imati na umu da pri postavljanju Coombsovog testa u slučajevima bolesti koje karakterizira razvoj disproteinemije ili pojava paraproteina, pozitivan rezultat je zbog prisustva na površini eritrocita proteina koji nemaju svojstva antitela, što takođe ukazuje na nedovoljnu specifičnost antiglobulinskih testova u pogledu prirode proteina otkrivenog uz njihovu pomoć.

Dakle, kako pokazuju brojne studije, pozitivni rezultati direktnih i indirektnih antiglobulinskih testova nisu apsolutni dokaz prisustva antitijela, jer se pozitivne reakcije mogu uočiti i kod različitih patoloških stanja koja nisu povezana sa izosenzibilizacijom ili autosenzibilizacijom organizma. Stoga je samo poređenje rezultata nekoliko imunoseroloških metoda sa kliničku sliku bolest vam omogućava da u potpunosti procenite patološki proces u razvoju.

Pozitivan indirektni antiglobulinski test sa negativnim direktnim testom obično ukazuje na prisustvo slobodnih aloantitijela u test serumu, povezanih s prethodnim transfuzijama krvi ili trudnoćama.

Coombsov test je često pozitivan tokom egzacerbacije paroksizmalne noćna hemoglobinurija; pozitivan Coombsov test sa anti-C3 i anti-C3dg je marker bolesti hladnog aglutinina.

U slučajevima kada postoji visok rizik od razvoja hemolitičke bolesti novorođenčeta, rezultati direktnih i indirektnih antiglobulinskih testova su od velike važnosti za postavljanje dijagnoze (najčešće u trudnoći) i po potrebi dinamičko praćenje izgleda i promjene. u titru antitela. Najčešće je hemolitička bolest novorođenčeta povezana sa nekompatibilnošću majke i fetusa za antigen D, rjeđe za antigene AB0 sistema, a još rjeđe za druge antigene (C, c, K itd.). Nastala antitijela la, budući da su u pravilu nepotpuna antitijela Ig G klase, jasno se otkrivaju indirektnim antiglobulinskim testom. Kod ove bolesti od velikog je značaja tačno utvrđen titar i specifičnost otkrivenih antitela, jer postoji određena korelacija između nivoa antieritrocitnih antitela u krvi trudnice i moguće prognoze težine hemolitičke bolesti.

Indirektni Coombsov test je također potreban u kliničku praksu kako bi se osigurala sigurna transfuzijska terapija. Njegova implementacija je obavezna komponenta imunohematoloških studija davalaca i različitih kategorija primatelja, kao i rutinskih pregleda svih pacijenata zdravstvenih ustanova kojima je potrebna transfuzija krvi i njenih komponenti.

Indirektni antiglobulinski test koristi se u sljedećim slučajevima:

Za preciznije određivanje Rh pripadnosti (antigen D) sa nejasnim rezultatima određivanja Rh faktora drugim metodama (poliglucin, želatin, itd.);

Za otkrivanje slabih antigena eritrocita (Kell, Duffy, Kidd, Lewis, itd. sistemi) i antitela na ove antigene;

Za detekciju i identifikaciju aloimunih antieritrocitnih antitijela, uključujući antitijela koja uzrokuju hemolitičke posttransfuzijske reakcije;

Utvrditi prisustvo imunih antitela AB0 sistema u transfuzionim hemolitičkim komplikacijama;

Kao test kompatibilnosti za individualnu selekciju transfuzirane krvi i njenih komponenti.

Stoga je Coombsov test važan dijagnostički test koji se koristi u različitim oblastima medicine (hematologija, akušerstvo, reumatologija, transfuziologija, klinička i laboratorijska dijagnostika itd.). Poznavanje karakteristika Coombsovog testa pomoći će povećanju pouzdanosti rezultata i doprinijet će ispravnoj interpretaciji laboratorijskih podataka.

Književnost

1. Antitijela. Metode / ur. D. Cathy. — M.: Mir, 1991.

2. Bayramalibeyli I.E., Rahimov A.A., Gadzhiev A.B.. // Transfuzijska terapija anemije: udžbenik. vodič za doktore. - M.: Prakt. medicina, 2005. - S. 105-106.

3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// Transfuziologija. - 2006. - br. 2. - S. 39-62.

4. Donskov S.I.// Krvne grupe rezus sistema: teorija i praksa. - M.: VINITI RAN, 2005. - S. 180-186, 195.

5.Imunoserologija (normativni dokumenti) / komp. A.G. Bashlay, S.I. Donskov. — M.: VINITI RAN, 1998.

6.Istraživanje krvnog sistema u kliničkoj praksi / ur. G.I. Kozintsa, V.A. Makarov. — M.: Triada-X, 1997.

7. Levin V.I. O mehanizmu eritrodiereze i eritropoeze u periodu akutne posthemoragijske anemije: dr. sc. dis. …kand. med. nauke. - Minsk, 1968.

8. Rahimov A.A., Bairamalibeyli I.E.. // Osnove dijagnoze, prevencije i liječenja anemije. - M.: GOU VUNMTs Ministarstva zdravlja Ruske Federacije, 2002. - S. 204-209.

9. Čumakova E.D.. // Stvarni problemi hematologija i transfuziologija: materijali VI Kongresa hematologa i transfuziologa Republike Belorusije, Minsk, 24-25. maja 2007. / ur. A.I. Svirnovsky, M.P. Potapnjev. - Minsk: Republički naučno-praktični centar za hematologiju i transfuziologiju, 2007. - S. 50.

10. Coombs R., Mourant A., Race R. // Lancet. - 1945. - Vol. 2. - str. 15.

11. Freedman J. // J. Clin. Pathol. - 1979. - Vol. 32. - P. 1014-1018.

12. Holburn A.M. kontrola kvaliteta. Metode u hematologiji / ur. I. Cavill. - Edinburg: Churchill Livingstone, 1982. - Vol. 4. - P. 34-50.

13. Khan S.// CMAJ. - 2006. - Vol. 175, br. 8. - Str. 919.

14. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Vol. 63 (dodatak 7). - P. 719-721.

15. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Vol. 63 (dodatak 7). - P. 716-718.

16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F.// New Engl. J. Med. —1976. — Vol. 277. - P. 123-125.

17. Muirhead E.E., GrovesM., Brian S. // J. Lab. Clin. Med. —1954. — Vol. 44. - P. 902-903.

18. Rosse W.F.//Hosp. Prac. - 1995. - N 105.

19. Voak D., Downie D., Mooreb. et al. //Biotests Bull. - 1986. - Vol. 1. - P. 41-52.

20. Voak D., Haigh T., Downie D. et al. Mašine za pranje ćelija za antiglobulinske testove. Ponovljeno testiranje - nova metoda koja pokazuje neefikasnost jedne široko korišćene mašine - Sorvall CW1-AF2: izveštaj tehničkom ogranku DHSS, februar 1991.

21. Williams M.E., Thomas D., Harman C.P. et al. //Antimikrobna sredstva i kemoterapija. -1985. - str. 125-127.

22. Zarandona J.M., Yazer M.H. // CMAJ. - 2006. - Vol. 174, br. 3. - P. 305-307.

Medicinske vijesti. - 2008. - br. 3. - S. 33-36.

Pažnja! Članak je namijenjen medicinskim specijalistima. Ponovno štampanje ovog članka ili njegovih fragmenata na Internetu bez hiperveze na izvorni izvor smatra se kršenjem autorskih prava.