Anti Lewis co. Analýza na syfilis ELISA - dekódování analýzy

Cena na vyžádání

Položku můžete přidat do nákupního košíku zadáním množství

Výrobce: Diagnostické systémy

Země Rusko

Jednotka jednotka: sada

Typ balení: kartonová krabice

Článek: L-1823

Popis

Enzymový imunoassay testovací systém pro průkaz protilátek tříd G, M a A proti Treponema pallidum (T. pallidum) v lidském séru (plazmě) a mozkomíšním moku pro účely diagnostiky syfilis, kompletní sada reagencií pro stanovení 96x2, vhodné pro manuální metody a staging na automatických analyzátorech. Metoda je založena na principu „past“, který spočívá v tom, že se specifické antitreponemální protilátky všech tříd přítomných ve vzorku vážou současně s rekombinantními antigeny – analogy imunodominantních proteinů T.pallidum fixovanými v jamkách tablety a se stejnými antigeny značenými peroxidázou křenem, se společnou inkubací vzorků séra (plazmy) krve nebo lidského mozkomíšního moku a konjugátu. Změna barvy substrát-chromogenní směsi obsahující TMB, když je přidán do jamek tablety, ukazuje na přítomnost specifických protilátek proti světlému treponemu ve studovaných vzorcích.

Funkční účel

Detekce protilátek proti Treponema pallidum hraje důležitou roli v diagnostice syfilis, protože T. pallidum nelze izolovat z buněčné kultury a vzorky pro přímá definice patogeny jsou často nedostupné v latentních a pozdních stádiích onemocnění. V sérodiagnostice syfilis se používají netreponemové (RMP, RPR, VDRL) a treponemové (RPHA, RIF, ELISA) testy. ELISA testy pro stanovení celkových protilátek slouží k hromadnému screeningu darované krve a k diagnostice syfilis jako součást komplexu sérologických testů. Po úspěšné terapii reaktivita treponemových testů ve většině případů přetrvává.

Specifikace

Složení sady:
1. Polystyrenová deska 96 otvorů skládací - 2 ks,
2. Konjugát - průhledná žlutá kapalina,
3. Pozitivní kontrola - průhledná červená kapalina,
4. Negativní kontrola - průhledná zelená kapalina,
5. Promývací roztok, koncentrát, pH 6,9 až 7,6,
6. TMB - průhledná bezbarvá kapalina,
7. Roztok substrátu – čirá bezbarvá kapalina, pH ~4,2.
8. Zastavte činidlo (0,2 M),
9. Návod k použití a certifikát kvality.
Podmínky skladování: při teplotě +2...8°C, zmrazení je nepřípustné.
Skladovatelnost - 15 měsíců od data výroby uvedeného na štítku soupravy.
Soulad s požadavky TU 9398-182-05941003-2010.
Registrován v Roszdravnadzor.

Je velmi důležité vybrat přesně ty testy, metody nebo diagnostické metody, které skutečně pomohou k přesné diagnóze, a ještě více nezmást lékaře. Enzymově vázaný imunosorbentní test se již dlouho etabloval jako metoda, která umožňuje nejen získat kladnou nebo zápornou odpověď na otázku - zda je člověk nemocný nějakou sexuální infekcí, ale také určit, v jaké fázi vývoje se nemoc nachází, a také k pochopení, zda pacient měl podobný problém v anamnéze. ELISA na syfilis je dnes jedním z nejcitlivějších a nejspecifičtějších testů, přičemž jeho přesnost je asi 90 %.

Testovací systémy využívající metodu enzymové imunoanalýzy jsou navrženy tak, aby detekovaly nejen syfilis, ale také mnoho dalších infekcí: hepatitidu, HIV, CMV, herpes, toxoplazmózu atd. Test ELISA na syfilis umožňuje stanovit protilátky (IgG, IgA, IgM) proti bledému treponému obsaženému v krvi nemocného člověka. Tato metoda umožňuje vidět interakci protilátek se speciálními přípravky, které obsahují antigeny, které v kombinaci s protilátkami mohou tvořit příznak onemocnění, což je jasně viditelné v různých diagnostických metodách.

Enzymově vázaný imunosorbentní test na syfilis je založen na metodě interakce protilátek detekovaných v krvi s antigenem infekčního agens. Diagnóza bude záviset na tom, které protilátky byly použity: lze detekovat buď protilátky určité třídy nebo obecně. Pro diagnostiku této metody se krev odebírá na prázdný žaludek z žíly.

Krevní test ELISA na syfilis zahrnuje použití tří tříd imunoglobulinů: G, M, A. Tyto imunoglobuliny mají jednu vlastnost, která je důležitá pro diagnostiku syfilis metodou ELISA: jsou vyráběny v přesně definovaném pořadí, díky čemuž vám ELISA umožňuje určit, v jaké fázi se proces nachází a jaká je dynamika jeho vývoje:

• Imunoglobulin M v krvi ukazuje, kolik času uplynulo od infekce. Pozitivní výsledky jeho přítomnosti však nemusí vždy znamenat přítomnost pohlavně přenosné choroby: je možné, že u člověka došlo k exacerbaci některých chronická nemoc což vyvolalo takovou reakci.
• Přítomnost IgA protilátek znamená, že od nákazy uplynul minimálně měsíc.
• Protože imunita vůči tuto nemoc se neprodukuje, pozitivní výsledek IgG testu může ukázat jak vrchol onemocnění, tak období po terapii.

Co znamená ELISA na syfilis pozitivní?

Je třeba poznamenat, že ELISA pozitivní na syfilis není důvodem k panice. Faktem je, že tato metoda umožňuje určit pouze přítomnost protilátek, ale ne patogen. Pokud je tedy výsledek ELISA na syfilis pozitivní, není to ještě základ pro stanovení diagnózy. Ve vědeckém světě se však testovací systémy denně zdokonalují a dnes to znamená, že ve většině případů lze výsledkům analýz stále věřit.

Existují pouze dva diagnostické výsledky: „pozitivní“ a „negativní“. V prvním případě pozitivní údaje znamenají, že pacient má onemocnění v jednom ze stádií nebo že nedávno dokončil léčbu. Negativní výsledek enzymatické imunoanalýzy znamená buď nepřítomnost onemocnění, nebo velmi rané stadium jeho vývoje.

Klinický obraz prvního stadia syfilis představuje detekce tvrdého chancre v různých oblastech.

První příznaky syfilis se objevují 3-5 týdnů po infekci. Do této chvíle onemocnění probíhá bez jakýchkoliv vnějších projevů.

Velmi často po nechráněném styku osoba, která má podezření na syfilis, HIV nebo hepatitidu.

Recenze a komentáře

Manžel byl testován na syfilis, ELISA na syfilis - pozitivní, RMP na syfilis - negativní. A co to znamená?

Během těhotenství (období bylo 37 týdnů) bylo skóre ELISA pozitivní 2,1. Po porodu jsem si dělala 2x testy - vše negativní. Po 6 měsících opět prošla, ELISA - pozitivní, CP=1,9 (IgM+IgG). Co to znamená.

Ahoj! Co to znamená: krevní test na syfilis ELISA (celkem at.) je pozitivní?

Řekněte mi prosím, co znamená rmp1+, rpga 1+ ifa celkem je záporné! Děkuji předem.

ELISA je falešně pozitivní!

Zanechat recenzi nebo komentář NEJNOVĚJŠÍ PUBLIKACEVENEROLOGICKÉ NOVINKYBalanopostitidaSyfilisHerpesAntikoncepce Krevní test ELISA

Pro komplexní posouzení stavu těla (zejména jeho ochranných funkcí) je předepsána ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). Krevní test ELISA se provádí k diagnostice infekčních, autoimunitních, hematologických patologií, primárních a sekundárních imunodeficiencí. V tomto článku navrhujeme podrobněji zvážit, co je krevní test ELISA, a také jaké indikace existují pro jeho provedení.

Indikace pro jmenování krevního testu pomocí ELISA a princip jeho působení

Jak jsme již uvedli, krevní test ELISA je laboratorní výzkum, který detekuje antigeny nebo protilátky ve vzorku krve. Tato analýza se používá k detekci hladiny hormonů, imunologických komplexů a imunoglobulinů. Pro provedení analýzy ELISA existují následující indikace:

• Diagnostika alergie.
• Diagnostika onemocnění virového původu - virus Epstein-Barrové, herpes, hepatitida, cytomegalovirus.
• Diagnostika sexuálně přenosných infekcí - mykoplazma, ureaplazma, syfilis, trichomonas, chlamydie.
• Definice imunodeficience.
• Diagnostika onkologických patologií.
• Hodnocení účinnosti terapie.
• Stanovení hladiny hormonů.
• Předoperační komplexní vyšetření.

Princip účinku enzymového imunotestu je založen na krevním testu na přítomnost imunoglobulinů (specifických proteinových protilátek). Imunoglobuliny jsou produkovány imunitním systémem, když antigeny (cizí mikroorganismy) vstupují do lidského těla. Tyto imunitní molekuly se vážou na různé infekční agens a neutralizují je. Důležitým rozlišovacím znakem, který imunoglobuliny mají, je jejich specificita. Díky těmto vlastnostem mohou tvořit komplex antigen-protilátka vazbou na specifický antigen. Při krevním testu ELISA je kvantitativně a kvalitativně stanoven tento komplex.

Pro tuto studii se často používá lidská krev. Jako materiál pro analýzu však můžete vzít obsah sklivce, plodová voda, mozkomíšní mok. Vzorek krve se obvykle odebírá z pacientovy loketní žíly. Doporučuje se darovat krev nalačno (od posledního jídla musí uplynout alespoň 12 hodin). Pokud pacient vezme léky musí být hlášeny lékaři, protože některé z nich mohou ovlivnit výsledek analýzy. Také spolehlivost výsledků testů je ovlivněna užíváním drog a alkoholu.

Rozluštění krevního testu na ELISA

Forma této analýzy obvykle indikuje negativní (-) nebo pozitivní (+) výsledek výpočtu každé třídy imunoglobulinů.

Navrhujeme zvážit interpretaci pravděpodobného dekódování krevního testu pro ELISA.

• IgG, IgA nejsou detekovány a výsledek IgM je negativní - úplné uzdravení.
• Výsledek IgM, IgA, IgG je negativní - není imunita vůči infekci.
• IgG výsledek, IgA pozitivní a negativní, stejně jako výsledek IgM pozitivní- přítomnost akutní infekce.
• Pozitivní výsledek IgG a negativní výsledek IgA a IgM - postvakcinační nebo poinfekční imunita.
• Pozitivní nebo negativní výsledek IgG, IgA a negativní IgM je chronická infekce.
• Výsledek IgG, IgM, IgA je pozitivní - exacerbace chronické infekční patologie.

V enzymové imunoanalýze jsou kromě objasnění tříd protilátek v transkriptu uvedeny jejich kvantitativní ukazatele. Obsáhlé vysvětlení k nim však podává pouze ošetřující lékař.

Výhody a nevýhody této studie

• Relativně nízké náklady.
• Snadnost použití.
• Možnost diagnostiky raná fáze podezření na onemocnění.
• Relativně vysoká přesnost získaných dat.
• Krátké časové období potřebné k získání výsledku studie.
• Schopnost sledovat dynamiku vývoje infekční proces v organismu.
• Vysoká úroveň sjednocení, která umožňuje provádět hromadné průzkumy.
• Automatizace všech fází výzkumu.

Nevýhodou krevního testu ELISA je, že může být docela vzácné případy dávají falešně pozitivní nebo falešně negativní výsledky. Také během studia kromě technických chyb důvod falešné výsledky pacient může mít revmatoidní faktor, přítomnost chronická onemocnění(při kterém se tvoří protilátky), užívání některých léků, metabolické poruchy.

• Giardiáza.
• Ascariáza.
• Cysticerkóza.
• Amébóza.
• Trichinelóza - studie se provádí více než jednou, 4-12 týdnů po infekci se stanoví maximální hladina protilátek.
• Teniáza.
• Opisthorchiáza - provádějí diferenciální diagnostiku mezi akutní a chronickou formou onemocnění.
• Toxoplazmóza.
• Fasciolóza - in akutní stadium onemocnění je určeno přítomností protilátek.
• Kožní nebo viscerální leishmanióza.

Při použití materiálů z webu je aktivní reference povinná.

Informace uvedené na našich webových stránkách by neměly být používány pro vlastní diagnostiku a léčbu a nemohou nahradit konzultaci s lékařem. Upozorňujeme na přítomnost kontraindikací. Je nutná konzultace specialisty.

Jaké krevní testy se provádějí na syfilis: RW, RPHA, ELISA, VDRL, RPR, RIBT, dekódování výsledků testů

Syfilis je infekční onemocnění způsobené spirochetou Treponema pallidum, náchylné k progresivnímu chronickému průběhu, s jasnou periodizací klinických příznaků.

Převaha pohlavního přenosu nad kontaktním a transplacentárním řadí toto onemocnění do řady sexuálně přenosných chorob (STD, STI). Kromě těchto způsobů přenosu infekce hraje zvláštní roli umělá cesta (z latinského „artificio“ – uměle vytvořená).

Je typický pro zdravotnická zařízení, realizovaný především v nemocničním prostředí. K infekci dochází při krevních transfuzích, různé chirurgické operace, invazivní diagnostické metody.

I přes karanténu darované krve je problém odhalit syfilis u dárců různé fáze nemoc je stále přítomna.

Diagnostická opatření pro syfilis proto vyžadují standardizaci, zavedení nových citlivých a informativních metod identifikace a také minimalizaci chyb a chybné interpretace výsledků testů.

Klasifikace laboratorních diagnostických metod

Diagnóza syfilis má některé rysy a liší se od diagnózy jiných. bakteriální infekce. Složitá struktura a antigenní vlastnosti bledého treponému způsobují chyby v interpretaci výsledků sérologických testů.

Krevní test na syfilis je nabízen 3 hlavním skupinám pacientů:

1 Screening a klinické vyšetření skupin populace (včetně těhotenství, registrace v prenatální poradna, přijetí do práce a registrace lékařské knížky a tak dále).

2 Screening v rizikových skupinách (nechráněný pohlavní styk s osobou nakaženou syfilis, osoby po nuceném pohlavním styku, HIV infikované atd.).

3 Osoby s příznaky nebo s podezřením na syfilitickou infekci.

Všechno laboratorní metody podmíněně se dělí na přímé a nepřímé.

Přímé metody

1 Identifikace Treponema pallidum v tmavém poli (mikroskopie v tmavém poli).

2 Infekce pokusných zvířat (kultivace na laboratorních zvířatech).

3 PCR (polymerázová řetězová reakce).

4 DNA sonda nebo hybridizace nukleové kyseliny.

Nepřímé metody

Sérologické reakce jsou laboratorní diagnostické metody založené na průkazu protilátek (zkráceně AT) proti antigenům světlého treponemu (zkráceně AG). Jsou nezbytné pro potvrzení diagnózy.

1 Netreponemální testy:

• Wassermanova reakce (RSK);
• Mikroprecipitační reakce (MR, RMP) a její analogy, které jsou uvedeny níže;
• Rapid plasma reagin test (RPR, RPR);
• Test s červeným toluidinem a sérem (TRUST);
• Netreponemální test Laboratoře pro studium pohlavně přenosných chorob - VDRL.

2 treponemální testy:

• R-tion imobilizace Treponema pallidum - RIBT / RIT;
• R-tion imunofluorescence - RIF, FTA (ředění sér RIF-10, RIF-200, RIF-abs);
• R-tion pasivní hemaglutinace (RPHA, TRPGA, TPHA);
• ELISA (ELISA, EIA);
• Imunoblotting.

Obrázek 1 - Algoritmus sérodiagnostiky syfilis

Histomorfologické metody

Tyto metody jsou redukovány na identifikaci znaků histomorfologie syfilitických projevů. Pozornost je věnována jemnosti struktury tvrdého chancre. Nicméně, diferenciální diagnostika infekce pomocí histologie je velmi obtížná. Histomorfologie se používá s dalšími laboratorními a klinickými testy.

Mikroskopie v tmavém poli Treponema pallidum

Tato metoda je založena na přímém průkazu světlého treponemu ve studovaném materiálu pomocí mikroskopu a speciálních přístrojů (nejčastěji výtok erozí a vředů, méně často likvor a další substráty).

Pomocí skarifikace, škrábání, vymačkávání z erozí a ulcerózních defektů se získá exsudát, poté se připravený přípravek zkoumá pod mikroskopem.

Obvykle jsou bledé treponemy detekovány v přípravku získaném z chancre, z ložisek sekundární čerstvé, sekundární recidivující syfilis, stejně jako tečkovité lymfatické uzliny, placenta.

Na základě fenoménu záře malých částic v tmavém poli při dopadu paprsku světla (Tyndallův fenomén) metoda dokonale umožňuje odlišit původce syfilis od jiných treponém na základě morfologických rozdílů a rozdílů ve způsobech bakterie se pohybuje.

Pro mikroskopii se používá speciální temný kondenzor s příslušným optickým rozlišením. Droga se získává metodou drcené kapky (kapka materiálu se nanese na čisté odtučněné podložní sklíčko a překryje se velmi tenkým krycím sklíčkem).

Na krycí sklíčko se nakape imerzní olej. Otáčením tubusu a otáčením lupy se nastavuje požadované osvětlení.

V tmavém poli mikroskopu jsou detekovány krvinky, epitelové buňky a původce syfilis. Bledý treponema vypadá jako spirála, velmi tenká, vyzařující stříbřitou barvu, s hladkými pohyby.

Obrázek 2 - Mikroskopie v tmavém poli jako způsob vizualizace světlého treponému ve studovaném materiálu. Zdroj obrázku - CDC

Treponema pallidum je nutné odlišit od ostatních treponem, včetně Tr. refringens, které lze nalézt v orofaryngu a sliznici genitálií. Tato bakterie dělá chaotické pohyby, má široké a asymetrické, spíše hrubé kadeře. Kromě toho se Treponema pallidum odlišuje od Tr. Microdentium, Tr. Buccalis a Tr. vincenti.

Vizualizace bakterií v tmavém poli je někdy doplněna fluorescenční reakcí. K tomu se k nativnímu materiálu přidávají antitreponemální protilátky značené fluorescenčním barvivem. Vzniká tak komplex nazývaný antigen-protilátka (zkráceně AG-AT), který je předmětem studia pomocí fluorescenčního mikroskopu.

Metoda polymerázové řetězové reakce (PCR).

PCR, vyvinutá v roce 1991 k detekci molekuly deoxyribonukleové kyseliny (DNA) treponema pallidum, je vysoce citlivá a specifická a umožňuje detekci fragmentů DNA patogenu.

Tato analýza je založena na kopírování krátkých úseků DNA spirochety pallidum, která splňuje stanovené parametry a je přítomna ve vzorku. To vše se děje za umělých podmínek (in vitro). Reakce se provádí v zařízení - zesilovači, který zajišťuje periodizaci teplotních cyklů. Dojde k ochlazení a následnému zahřátí zkumavek s chybou 0,1˚С.

DNA templát se zahřívá po dobu 2 minut na teplotu 92-98°C (maximální teplota se použije, pokud je polymeráza termostabilní). Při zahřátí se vlákna DNA rozcházejí v důsledku rozpadu vodíkových vazeb mezi nimi. V kroku nasedání se reakční teplota sníží, aby se primer navázal na jednořetězcový templát.

Žíhání trvá asi 30 sekund, během kterých se syntetizují stovky nukleotidů. Nově syntetizované molekuly jsou zkopírovány polymerázou, v důsledku čehož se specifické fragmenty deoxyribonukleové kyseliny mnohonásobně zvětší. Následná detekce fragmentů se provádí pomocí elektroforézy na agarovém gelu.

PCR diagnostika syfilis má stále experimentální charakter, ale má své opodstatnění při zjištění vrozené infekce, v obtížných diagnostických případech nebo při minimálním obsahu světlého treponemu v testovaném materiálu.

DNA hybridizace

DNA hybridizace se provádí in vitro a je založena na úplném nebo částečném spojení dvou jednořetězcových molekul DNA do jedné molekuly. V případě úplné shody komplementárních fragmentů je spojení snadné. Pokud je komplementární shoda částečná, pak k asociaci řetězců DNA dochází pomalu. Na základě doby fúze řetězce lze odhadnout stupeň komplementarity.

Když se DNA zahřeje v tlumivém roztoku, vodíkové vazby se přeruší dusíkatými bázemi, které jsou komplementární, v důsledku toho se řetězce DNA rozcházejí. Dále se získá přípravek ze dvou denaturovaných deoxyribonukleových kyselin. Po ochlazení se jednovláknové oblasti renaturují. Vzniká tzv. DNA hybrid.

Metoda umožňuje odhadnout a analyzovat rychlost žíhání s přihlédnutím k rysům (podobnosti a rozdíly) DNA mezi druhy nebo v rámci druhu.

Použití DNA sondy spočívá v hybridizaci značeného fragmentu DNA se specifickou oblastí DNA pro identifikaci komplementárních nukleotidových sekvencí. K označení sondy se používá skupina nenasycených atomů (chromoforů) nebo radioaktivních izotopů.

DNA sonda se používá pro heterogenní a homogenní detekci nukleových kyselin. Úlohou sondy je určit oblasti, kde došlo k fúzi cíl-sonda. Detekce v homogenním systému má výhodu v možnosti sledovat hybridizaci molekul DNA v reálném čase.

Podstata metody se redukuje na denaturaci a renaturaci DNA (znovusjednocení řetězců DNA). Proces renaturace nukleové kyseliny a DNA sondy končí vytvořením „hybridu“.

Specifické sekvence nukleových kyselin hybridizují s DNA sondou, a tak jsou detekovány a umožňují odhadnout množství DNA v testovaném materiálu.

Infekce laboratorních zvířat

Vysoká citlivost králíků na Treponema pallidum (asi 99,9 %) umožňuje jejich použití v diagnostice syfilitické infekce.

Infekce králíků se provádí ve výzkumných centrech a je „zlatým standardem“ pro hodnocení citlivosti ostatních metod.

Vraťme se k treponemálním a netreponemovým testům, protože se používají nejčastěji. Zvažte jejich výhody a nevýhody, stejně jako chyby při interpretaci výsledků.

Netreponemální testy

To jsou testy k určení IgG protilátky a IgM na standardizovaný kardiolipinový antigen. Jejich významnou nevýhodou je relativně nízká specifičnost.

Nízká cena a snadná implementace umožňují klasifikovat tyto testy jako screeningové diagnostické testy nezbytné pro stanovení předběžné diagnózy a screeningu mezi populací.

Právě netreponemální testy se dávají při registraci lékařské knížky, žádosti o zaměstnání, registraci v prenatální poradně.

1 Minimální citlivost ve stadiu primární syfilis - 70 %;

2 Minimální citlivost ve stadiu pozdní syfilis - 30 %;

3 Možnost falešně negativních a falešně pozitivních výsledků;

4 Složitost implementace RSC.

1 Relativně nízké náklady na výrobu testu;

2 Získejte rychlou odpověď;

3 Možnost jejich aplikace pro screening.

Získání falešně pozitivních nebo slabě pozitivních vzorků je možné v následujících případech:

1 Porušení technologie provádění při blokování komplexu AG-AT.

2 Přítomnost pacienta autoimunitní onemocnění(revmatoidní artritida, revmatismus, sklerodermie, systémový lupus erythematodes, sarkoidóza atd.).

3 Zhoubné novotvary.

4 Virové a bakteriální infekce.

5 Endokrinní onemocnění (autoimunitní tyreoiditida, diabetes mellitus).

6 Těhotenství.

7 Pití alkoholu.

8 Jíst tučná jídla.

9 stáří.

Jak můžete vidět ze seznamu, existuje dostatek důvodů pro nesprávný výsledek. Proto je třeba s ním zacházet velmi opatrně. Podívejme se na další dva vzorky spolu s RSC. Jedná se o mikroprecipitační reakci a VDLR (její modifikaci).

Reakce fixace komplementu (RSK, Wasserman, RW)

Jedná se o test založený na schopnosti komplementu vázat se na komplexy AG-AT. Výsledný komplex je identifikován pomocí hemolytického systému. Kardiolipinový antigen významně zvyšuje citlivost vzorku.

Citlivá je Colmerova reakce, která spočívá v provádění za různých teplotních podmínek. První fáze Colmerovy reakce tedy probíhá při teplotě 20˚С po dobu půl hodiny, druhá fáze při teplotě 4-8˚С po dobu 20 hodin. Během této doby dochází k vazbě komplementu.

Při provádění RSK je možné získat ostře pozitivní výsledky. Důvodem je pravděpodobně velký titr protilátek v neředěném séru. V tomto případě jsou vzorky umístěny s klesajícími dávkami.

Pro rozlišení stadií syfilis a hodnocení účinnosti antisyfilitické léčby se stanovuje množství protilátek v séru.

Pozitivita vzorku je hodnocena pomocí křížení, u Wassermanovy, Colmerovy a Cannovy reakce je indikováno i ředění séra.

Mikroprecipitační reakce

Vzhledem k vysoké náročnosti provádění výše uvedených testů byla pro široké pokrytí lékařských vyšetření různých skupin populace vyvinuta zrychlená metoda sérodiagnostiky syfilis, tzv. expresní metoda, mikroprecipitační reakce (zkráceně MR, RMP). .

Provádí se s kardiolipinovým antigenem a pomocnými látkami. Jeho výhodou je odběr periferní krve pro výzkum. To výrazně urychluje jak samotnou techniku, tak práci laborantů.

Obrázek 2 - Mikroprecipitační reakce (schéma)

MR vyžaduje plazmu nebo inaktivované sérum pacienta (obsahují protilátky). Poté se plazma umístí do označených jamek. Poté se k testovanému materiálu přidá kapka kardiolipinového antigenu, promíchá se a protřepe. V důsledku toho se v séru infikované osoby objevují charakteristické vločky s různou intenzitou.

Toto je test kvality. Kvantifikace používá 10 ředění séra umístěného do 10 vhodně označených jamek. U kvalitativní MR je odpověď indikována ve formě křížků (plus) nebo mínus, u kvantitativní MR je indikován titr protilátek (1:2, 1:4 atd.).

Přítomnost vloček je považována za pozitivní nebo slabě pozitivní odezvu. Výskyt vloček je také možný v nepřítomnosti onemocnění, proto se konečné hodnocení získaného výsledku provádí po kontrolní studii nebo jiných reakcích (RIBT, RIF, ELISA, RPHA).

Metoda doporučená Světovou zdravotnickou organizací pro nastavení reakce s antigenem lipoidní povahy (AH) je právem považována za nejlepší mezi ostatními standardními netreponemovými testy. Vyvinuto v USA, Georgii v laboratoři pohlavních chorob (Veneral Diseases Research Laboratories).

Jako název vzorku posloužila zkratka instituce – VDRL. VDRL je modifikace MP. Sérum od pacienta se syfilidou se inaktivuje a umístí na podložní sklíčko. Použitý antigen se skládá z kardiolipinu, cholesterolu a lecitinu v různých procentech. Odpověď je zaregistrována téměř okamžitě.

V přítomnosti protilátek v séru dochází ke zřetelné flokulaci. Sérum se stává reaktivním 4 týdny po infekci. Pro stanovení množství protilátek se sérum exponenciálně předředí.

1 relativně vysoká citlivost;

2 relativně vysoká specificita;

3 snadnost implementace;

4 nízké náklady na činidla;

5 získat rychlou odpověď.

Nevýhodou VDRL je relativně vysoká míra falešné pozitivity.

Jejich příčiny jsou všechny stejné nemoci uvedené výše.

Treponemální testy se provádějí se specifickými antigeny Treponema pallidum. Pro založení jsou nezbytné a povinné konečná diagnóza. Jedná se o imunofluorescenční reakci (RIF), nepřímou hemaglutinační reakci (IPHA), enzymovou imunoanalýzu (ELISA) atd.

Po pozitivním výsledku netreponemálního testu (RPR, MP, VDRL) by měly být vždy provedeny treponemální testy (častěji kombinace - RPHA, ELISA, RIF).

Treponemální testy jsou obtížnější než rychlé testy a stojí více peněz.

Tato reakce (zkráceně RIF) se používá k diagnostice syfilis, včetně latentních forem, ak opětovné kontrole pozitivních a falešně pozitivních vzorků.

RIF je založen na záři značených protilátek při kombinaci s komplexem antigen-protilátka pod křemennou lampou. Metoda se začala používat v 60. letech a vyznačovala se snadností implementace a vysokou specifičností (která je mírně horší než RIBT).

Má několik modifikací: RIF-10, RIF-200 a RIF-abs.

Nejcitlivější RIF v ředění je 10krát a zbytek je specifičtější. RIF se provádí ve dvou fázích. K AG se přidá pacientovo krevní sérum. Vzniká komplex AG-AT, který je zkoumán v další fázi. Komplex značený fluorochromem je pak identifikován mikroskopicky. Pokud není pozorována žádná záře, znamená to nepřítomnost specifických protilátek v krevním séru.

RIF-200 je nejcennější ze všech ředění. Metoda je určena pro diagnostiku různé formy syfilis, zejména latentní syfilis, a křížové kontroly pozitivních vzorků.

Imobilizační reakce Treponema pallidum (zkráceně RIBT, RIT) je jedním z komplexních sérologických testů, které vyžadují značné úsilí a finanční náklady. RIBT se používá stále méně, ale jeho význam zůstává v diagnostice latentní syfilis.

Má velký význam při rozpoznání falešně pozitivních výsledků u těhotných žen a je založena na imobilizaci bakterií za přítomnosti imobilisinů – pozdních protilátek.

Výsledek je vyhodnocen na procento (%) imobilizovaného treponemu pomocí speciální tabulky:

1 Od 0 do 20 - negativní test.

2 Od 21 do 50 – slabě pozitivní test.

3 Od 50 prepozitivní reakce.

Falešně pozitivní výsledky jsou také možné s RIBT. Nesprávná odpověď je tedy možná u infekce tropickou trepanematózou, stejně jako u tuberkulózy, cirhózy jater, sarkoidózy a senilních pacientů.

Tento krevní test na syfilis se nazývá pasivní hemaglutinační test (zkráceně krev pro TPHA, TPHA).

Antigen pro TPHA se připravuje z beraních erytrocytů potažených fragmenty světlých treponem (získaných z infikovaných králíků (viz obrázek 4)). Používá se pro analýzu odkysličená krev(plazma nebo inaktivované sérum) pacienta.

Po přidání antigenu do séra pacienta se syfilidou se vytvoří komplex AG-AT, který vede k aglutinaci červených krvinek. aglutinaci zjišťuje subjektivně laborant.

Obrázek 3 - Schéma RPHA (pasivní hemaglutinační reakce)

Vzorek je hodnocen jako pozitivní, když se objeví aglutináty jednotné růžové barvy. Červená barva sraženiny ukazuje na ukládání erytrocytů. RPHA je vysoce citlivý a vysoce specifický.

Mikrohemaglutinační reakce

Je to zjednodušená verze RPGA. Od výše popsaného vzorku se liší tím, že obsahuje méně antigenu, ředidla a krevního séra pro provedení reakce. Vzorek lze vyhodnotit 4 hodiny po inkubaci séra. Používá se při screeningu a hromadných vyšetřeních na syfilis.

Propojený imunosorbentní test

Enzyme-linked immunosorbent assay (zkráceně ELISA) je založen na specifické reakci antigen-protilátka. biologický materiál(krevní sérum pacienta, mozkomíšní mok) jsou zavedeny do jamek, na jejichž pevném povrchu jsou fixovány antigeny světlého treponemu. Testovaný materiál se inkubuje, poté se protilátky, které se nenavázaly na antigeny, smyjí (viz obrázek 5).

Identifikace výsledného komplexu se provádí ve fázi fermentace pomocí imunitního séra značeného enzymem. Během chemické reakce enzym zbarví výsledné komplexy. Intenzita barvení závisí na množství specifických protilátek v krvi pacienta a je zaznamenávána spektrofotometrem.

Obrázek 4 - Schéma ELISA (enzymatická imunoanalýza)

Citlivost ELISA je více než 95 %. Metoda se používá v automatizovaném režimu ke studiu stanovených skupin populace: dárců, těhotných žen a dalších, k objasnění diagnózy v případě pozitivních a falešně pozitivních netreponemových testů.

Imunoblotting

Imunoblotting je vysoce citlivá metoda, modifikace jednoduché ELISA. Reakce je založena na elektroforéze se separací světlých treponemových antigenů.

Separované imunodeterminanty jsou přeneseny na nitrocelulózový papír a ukázány v ELISA. Sérum se poté inkubuje a nenavázané protilátky se vymyjí. Výsledný materiál je ošetřen enzymem značenými imunoglobuliny (IgM nebo IgG).

Klinické hodnocení výsledků laboratorní diagnostiky syfilis

V tabulce 1 níže máme možné výsledky analýzy a jejich interpretace. Jak můžete vidět v tabulce, hlavní hodnotou při dešifrování je komplexní hodnocení testů.

Tabulka 1 - Dešifrování výsledků sérologických reakcí (krevní testy na syfilis). Pro zobrazení klikněte na tabulku

Reaktivita testů je také hodnocena "křížkami":

1 Maximální odpověď (silně pozitivní test) je označena 4 křížky.

2 Pozitivní vzorek je označen 3 křížky.

3 Slabě pozitivní reakce je označena dvěma křížky.

4 Jeden křížek označuje pochybný a negativní výsledek.

5 Negativní odpověď je označena znaménkem mínus.

Problém optimalizace laboratorní diagnostiky syfilis dodnes neztratil na aktuálnosti. Moderní diagnostické metody, i přes snahu vědců dovést diagnostiku k co nejvyšší senzitivitě a specificitě, vyžadují kontrolní kontrolu a individuální přístup.

Charakteristickým rysem syfilitické infekce je fenomén sérorezistence, který nedostal vědecké vysvětlení. Diagnóza se provádí po úplném vyšetření pacienta epidemiologickými, klinickými, laboratorními metodami.

Na pozadí ekonomického a technického rozvoje medicíny dochází také k pokroku ve vývoji nových kritérií pro diagnostiku syfilis. To vše vám umožní rychle, úspěšně a přesně léčit pacienty.

1 FEDERÁLNÍ KLINICKÁ DOPORUČENÍ PRO LÉČBU PACIENTŮ SE SYFILIDOU. RUSKÁ SPOLEČNOST DERMATOVENEROLOGŮ A KOSMETOLŮ. Moskva 2013;

2 NAŘÍZENÍ MINISTERSTVA ZDRAVÍ RUSKÉ FEDERACE ze dne 26. března 2001 N 87 „O ZLEPŠENÍ SÉROLOGICKÉ DIAGNOSTIKY SYFILIDY“;

3 Syfilis. Pranatharthi Haran Chandrasekar, MBBS, MD profesor, vedoucí oddělení infekčních nemocí, interní klinika lékařské fakulty Wayne State University. Medsacape.com;

Pokyny pro léčbu sexuálně přenosných nemocí (CDC).

Když je předepsána analýza, proveďte test ELISA na syfilis. Metody laboratorní diagnostiky. Výsledky analýzy - jak určit normu a odchylky. Náklady na enzymovou imunoanalýzu.

Lékaři zpravidla neustále při kontaktu s klinikou předepisují různé testy. To jim umožňuje identifikovat infekce a nemoci, kterými člověk trpí. Skvělým způsobem hodnocení je ELISA, neboli tzv. enzymová imunoanalýza imunitní systém organismu a identifikovat infekci a stadium onemocnění přítomností protilátek.

Kdo je tedy pověřen provedením této analýzy a co je enzymatická imunoanalýza? Lékaři předepisují tuto analýzu, pokud má osoba následující nemoci:

• Vyrážka na těle - alergické reakce.
• Viry - herpes, cytomegalavirus.
• Pohlavně přenosné choroby - syfilis, Trichomonas.
• Patologie spojená s rakovinou.
• Neurosyfilis.

Kromě těchto onemocnění je předepsána analýza ke stanovení hladiny hormonu v krvi. Na základě výsledků se posuzuje kvalita terapie. Co je syfilis pravděpodobně každý ví, ale nepředstavuje její rozsah a kolik nakažených lidí chodí vedle nás.

V současnosti je syfilis nejčastějším onemocněním. Jedná se o treponom, který postihuje lidské tělo. A v důsledku toho jsou postiženi všichni. vnitřní orgány nemocný.

Toto je velmi nebezpečná infekce, a často se stává, že se třeba delší dobu neukáže. Člověk tedy může být nosičem a distributorem dlouhou dobu, aniž by věděl, že je nemocný.

Metoda laboratorní diagnostiky

Medicína nestojí, moderní analýzy se výrazně liší od starých metod studia těla. Přestože se své role zhostili perfektně, na výsledky museli někdy čekat týdny a měsíce. To přirozeně nebylo pro infikovanou osobu příznivé. Jaké je očekávání výsledku, nemocný člověk prošel.

Klasické analýzy - detekce syfilis Wassermanovou metodou, Kahnova metoda začala ztrácet své pozice a byla nahrazena takovými testy jako ELISA.

Tohle je nejvíc moderní metoda detekci infekce u lidí. Výsledek je dešifrován pomocí počítače. To vám umožní přesněji určit pozitivní výsledek nebo negativní test.

Přečtěte si také související

Co je STD? Příznaky, léčba

Během dekódování se hledají protilátky proti specifické nemoci. A jako výsledek analýzy bylo možné detekovat infekci, když byl výsledek pozitivní. Použití ELISA k detekci syfilis znamená třítřídní použití imunoglobulinů:

• G, M, A - pro diagnostiku jsou nejdůležitější.
• Vyrábějí se v infikovaná osoba přísně v určitém pořadí.
• Rychle určete stadium infekce.

Výsledky ELISA - normální a pozitivní analýza

Pokud mluví o analýze ELISA na syfilis, pak je v tomto případě obtížné říci, že existuje norma nebo odchylka. Výsledek je většinou buď negativní, nebo pozitivní. Kromě toho existují titry, které určují množství protilátek v krvi.

V dešifrování analýzy je mnoho jemností, pokud ukázala pozitivní výsledek, bude muset být analýza ještě několikrát opakována, aby se vyloučila metoda falešně pozitivní reakce.

Jak již bylo napsáno, při dešifrování analýzy existuje mnoho jemností a výsledek může určit pouze ošetřující lékař. V tabulce uvádíme příklady, které výsledky lze ukázat pro enzymovou imunoanalýzu:

Pokud analýza ukázala pozitivní výsledek, nezoufejte. Zpravidla se provádějí další analýzy a testy, různé způsoby pro přesnější diagnostiku.

Cena enzymové imunoanalýzy

Cena této analýzy zpravidla přímo závisí na samotné analýze a identifikaci konkrétní infekce. Stanovení markerů infekce různé druhy náklady od 200 do 350 rublů. A taková analýza se provádí do dvou dnů.

ELISA je nejoblíbenější a nejmodernější metoda diagnostiky organismu. Metoda prokázala svou účinnost při detekci infekce a stanovení přesné doby infekce.

Vzhledem k cenové politice lze říci, že analýza je dostupná každému člověku s jakýmkoli rozpočtem. Umožňuje ošetřujícímu lékaři získat úplný obraz o infekci člověka. Ukázal se v případu a lékaře nezklamal. Současně po obdržení analýzy mohl ošetřující lékař rychle reagovat a předepsat včasnou léčbu.

(odkaz na 3. článek v tomto souboru), umožňující posoudit schopnost těla odolávat infekční choroby a ukazující fázi onemocnění, důležité místo zaujímá enzymatická imunoanalýza (ELISA). Provedení této studie umožňuje komplexně posoudit aktivitu ochranné funkce krve a identifikovat stav imunodeficience u infekčních patologií, stejně jako krevních onemocnění, autoimunitních procesů a hormonálních problémů.

Jak je možné pokrýt tolik cílů v jedné analýze a jaké jsou indikace pro její realizaci? Zkusme na to přijít.

Co je krevní test ELISA?

Jedná se o laboratorní vyšetření, které umožňuje stanovit přítomnost specifických protilátek (ochranných krevních faktorů proteinové povahy) proti určitým antigenům (patogenním agens). Mezi protilátky prvořadého významu patří imunoglobuliny, které mohou existovat ve formě imunokomplexů.

Imunoglobuliny jsou produkovány jako výsledek komplexních lidských neurohumorálních reakcí, ke kterým dochází jako reakce na zavedení cizích antigenů. Každý typ patogenu produkuje své vlastní specifické protilátky. Působí „navázáním“ antigenu nebo patologického mikroorganismu, vytvořením komplexní sloučeniny „antigen-protilátka“, následovanou neutralizací, enzymatickou lýzou, fagocytózou a vylučováním z těla.

Poznámka:právě přítomností určitých komplexů určuje metoda ELISA typ patogenu nebo škodlivé látky přítomné u pacienta.

Základní principy fungování lidské imunity se můžete naučit sledováním této videorecenze:

Co jsou imunoglobuliny

Bylo objeveno a studováno 5 hlavních tříd imunoglobulinů – IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. role zbytku ještě není zcela objasněna a jsou ve fázi vědeckého výzkumu.

Poznámka:v praktické medicíně jsou nejdůležitější imunoglobuliny tříd - A, M a G. Informativnost definice je založena na různých časových intervalech jejich výskytu, maxima a mizení.

Zvažme tuto otázku podrobněji.

Hlavním úkolem imunoglobulinu A (IgA) jsou ochranné funkce sliznic dýchací trakt, gastrointestinální trakt a močového systému. Při akutním nástupu onemocnění je nemožné je identifikovat. Tyto ochranné komplexy se objevují až od 2. týdne počátku onemocnění, někdy i později. Většina imunoglobulinu A je koncentrována ve slizničních tkáních. Zhruba kolem 80 %. Zbývající protilátky cirkulují v krvi. Hlavní funkcí je neutralizace a ničení mikroorganismů. Po odeznění akutních projevů onemocnění se množství těchto imunoglobulinů začne snižovat a zcela vymizí až 8 týdnů po propuknutí onemocnění. Pokud jsou IgA nalezeny ve více než pozdní termíny, pak to znamená chronizaci procesu.

Hlavními a prvními markery akutní fáze rozvíjející se patologie jsou imunoglobuliny třídy M (IgM). Objevují se do 5. dne nástupu malátnosti. Jejich přítomnost v krvi můžete určit asi na 6 týdnů. Pak začnou rychle mizet.

Reziduální imunitní odpověď charakterizuje přítomnost imunoglobulinů třídy G (IgG) v krvi. Vzhled těchto faktorů v krvi je detekován přibližně jeden měsíc po začátku onemocnění. V budoucnu mohou být předurčeni na mnoho měsíců, let a dokonce i na celý život ochrannou funkci od návratu (relapsu) nemoci a v některých případech znemožnění sekundárního rozvoje patologie. Pokud se množství imunoglobulinu G začalo znovu zvyšovat, pak lze mít podezření reinfekce. Podobný závěr lze učinit provedením dvou nebo tří vzorků odebraných v intervalu 2 týdnů.

Imunoglobulin D (IgD) se nachází na B-lymfocytech, je v malé koncentraci v zdravých lidí. Po 10 letech života dosahuje svých maximálních hodnot. Množství imunoglobulinu D se během těhotenství u pacientek zvyšuje systémová onemocnění pojivové tkáně, onemocnění způsobená imunodeficiencí.

Indikace pro jmenování enzymového imunotestu

Stanovení protilátek proti přítomnosti patogenních mikrobů v těle, které způsobují:

• trichomoniáza;
• ureaplasmóza a.

Dochází ke zvýšení počtu imunoglobulinů a s.

Diagnostika se provádí za účelem zjištění:

• herpetická onemocnění;
• skupiny virové hepatitidy;
• virus Epstein-Barrové;
• cytomegaloviru.

Pomocí ELISA je možné stanovit přítomnost protilátek na 600 typů alergenů, zjistit stav imunodeficience, provést komplexní vyšetření před transplantačními operacemi a provést komplexní rozbor účinnosti léčby.

ELISA je další metoda pro detekci rakovinných buněk.

Jak se provádí krevní ELISA?

Pro enzymatický imunosorbentní test se ve většině případů používá krev pacientů, někdy se odebírá sklivec, mok z míšního kanálu a plodová voda.

Krev se odebírá injekční jehlou do injekční stříkačky z kubitální žíly. Studie se provádí na prázdný žaludek. Je třeba si uvědomit, že užívání určitých léků může ovlivnit výsledek analýzy. Před darováním krve se musíte zdržet kouření, pití alkoholu. Užívání omamných látek může zkreslit výsledky.

V případě negativních hodnot imunoglobulinů IgM, IgG, IgA lze hovořit o nepřítomnosti onemocnění nebo jeho počáteční fáze a výsledek s minusy je také možný s úplným zotavením po značné době.

Pokud nejsou detekovány IgA a IgM a IgG je pozitivní, pak se vší pravděpodobností mluvíme o vytvořené imunitě po infekčním onemocnění nebo po očkování.

V případě vysokého titru IgM s negativními hodnotami IgG, IgA lze usoudit, že se jedná o akutní infekční onemocnění.

Současné pozitivní hodnoty výsledků imunoglobulinů - IgA, IgM, IgG jsou charakteristické pro akutní fázi recidivy stávajícího chronického onemocnění.

U chronické infekce, která je ve fázi remise procesu, ELISA ukazuje negativní hodnoty imunoglobulinu M (IgM), zatímco výsledek imunoglobulinů G (IgG) a A (IgA) bude pozitivní.

Výhody metody enzymové imunoanalýzy

Hlavní výhody metody ELISA jsou:

• nízké náklady na analýzu;
• diagnostická specifičnost, přesnost;
• dynamická kontrola (opakovaná analýza ke stanovení účinnosti léčby a stádií onemocnění);
• možnost provádění hromadných vyšetření v ohniscích infekce;
• rychlost získání výsledku;
• relativní jednoduchost analýzy;
• možnost využití informačních technologií při zpracování;
• bezpečnost a bezbolestnost pro pacienta.

Existují nějaké nevýhody krevní ELISA?

Hlavním negativním bodem studie je možnost získání falešně negativních a falešně pozitivních dat. Příčinou nedorozumění mohou být technické nedostatky, užívání léků, které mohou obraz zkreslit.

ELISA se používá k detekci:

• (ascaris, pinworms);
• ostré a chronická forma opisthorchiáza;
• trichinelóza;
• přítomnost lamblie (jako další analýza);
• formy leishmaniózy;
• amébóza;
• obsah toxoplazmy;

Závěrem je třeba poznamenat, že moderní imunologie je neustále ve stádiu vývoje a hledá nové metody pro diagnostiku a léčbu nemocí.

Stepanenko Vladimir, chirurg